1. 引言

大多数结直肠癌患者属于微卫星稳定（MSS）类型，其中 KRAS 通路异常是最常见的驱动突变之一。KRAS 突变不仅影响肿瘤增殖和侵袭能力，还显著影响靶向药物和免疫治疗的疗效。在临床前研发中，针对 MSS/KRAS 通路的模型能够为化疗、靶向小分子药物及 ADC（抗体药物偶联物）提供关键的药效评估、剂量优化及机制研究平台。

2. 代表性细胞系与模型选择

2.1 MSS / KRAS 人源细胞系

常用细胞系包括 DLD-1、SW480 和 SW620。DLD-1 适合研究 KRAS 信号通路、小分子抑制剂以及耐药机制。SW480 来源于原发灶，更适合研究早期侵袭行为和局部药物作用。SW620 来源于淋巴结转移灶，适合高侵袭性和晚期转移背景的研究。这些细胞系可根据项目目标进行组合选择，以覆盖不同疾病阶段和转化需求。

2.2 模型类型

• 皮下 CDX 模型：适合早期药效筛选、剂量探索及横向比较。

• 原位盲肠/结肠模型：用于研究器官微环境对药物的影响以及局部侵袭。

• 肝转移模型：评估晚期 KRAS 突变肿瘤的肝定植及药物疗效。

• 同种免疫完整模型：可评估完整免疫系统下药物的作用，尤其在联合免疫策略中有重要价值。

3. 模型优势

3.1 分子分层指导药物开发

KRAS 突变模型能够反映临床上 MSS/KRAS 型结直肠癌患者的耐药和治疗反应特征。通过在模型中复现 KRAS 通路异常，可以预测小分子抑制剂、ADC 或联合方案在临床的潜在疗效。

3.2 高通量药效评估

皮下 CDX 模型操作标准化、重复性高，适合快速比较不同化疗药物、小分子靶向药或 ADC 的抗肿瘤活性。通过 TGI、终末瘤重、体重变化等指标，可筛选出最具潜力的候选药物。

3.3 原位和肝转移模拟

原位模型能够反映肠道微环境、局部侵袭及术后复发，便于研究药物在原发灶的穿透和抑制作用。肝转移模型则针对晚期患者常见的转移部位进行验证，能够评估药物对肝定植、微环境适应和耐药的影响。

4. 模型建立方法

4.1 皮下 CDX

DLD-1、SW480 或 SW620 细胞注射至免疫缺陷小鼠皮下，肿瘤达到 80–150 mm³ 后随机分组进行药物处理。周期通常为 2–4 周，可延长至 4–6 周用于耐药或长期药效观察。检测指标包括 TGI、终末瘤重、体重及分子机制指标。

4.2 原位盲肠/结肠模型

将 MSS/KRAS 细胞注射到盲肠或结肠壁，术后通过 IVIS 或肠镜进行动态监测。该模型能够观察局部浸润深度、肠壁侵袭以及微小残留病灶发展，为药物剂量优化和局部递药研究提供依据。

4.3 肝转移模型

可选择脾内注射或门静脉注射方式建立实验性肝转移，观察 KRAS 型肿瘤在肝脏的定植及生长。通过肝转移灶数量、体积及组织病理学分析，评估药物抑制转移效果和肝微环境适应性。

4.4 同种免疫完整模型

CT26 或 MC38 同种细胞可用于免疫完整小鼠，评估 MSS/KRAS 肿瘤在完整免疫系统下的药效及联合策略。检测指标包括流式免疫分型、TME 变化、肿瘤负荷及生存分析。

5. 检测指标

• 肿瘤负荷：体积、终末瘤重、IVIS      成像

• 药效评价：TGI、RTV、生存分析

• 分子机制：KRAS 信号通路活性、下游 MAPK/ERK、PI3K/AKT 变化

• 微环境分析：血管生成、免疫浸润及纤维化指标

• 耐药研究：长期药物处理后的信号通路反馈及耐药机制探究

6. 应用示例

6.1 化疗药物评估

在 DLD-1 或 SW480 模型中，可测试 5-FU、奥沙利铂及伊立替康的疗效，通过肿瘤抑制率和机制指标优化剂量和联合方案。

6.2 靶向小分子药物开发

针对 KRAS G12C 突变，可以评估特异性抑制剂（如 adagrasib）单药或联合 EGFR 抑制剂的效果。通过原位和肝转移模型，可研究药物在不同器官微环境下的活性和耐药机制。

6.3 ADC 及联合策略

通过皮下和原位模型，可比较 ADC 不同 payload 的抗肿瘤活性，并结合化疗或免疫治疗进行联合方案评估，提升临床转化潜力。

7. 局限性与注意事项

MSS/KRAS 模型在免疫缺陷小鼠中建立时无法完全反映完整免疫系统，需要结合同种或人源化模型验证免疫相关药物效果。原位和肝转移模型操作技术要求高，周期较长，应合理安排实验设计以保证数据可靠性。

8. 总结

MSS/KRAS 模型通过复现 KRAS 信号通路异常和 MSS 背景，为化疗、小分子靶向药及 ADC 的药效筛选、剂量优化和耐药机制研究提供了可靠平台。结合皮下、原位、肝转移和同种模型，可实现从早期药效筛选到机制深入研究的全链路验证，为临床转化提供重要参考。