db/db小鼠是2型糖尿病肾病药效研究中使用较多的自发性模型。

随着年龄增长，动物逐渐出现肥胖、高血糖、胰岛素抵抗、肾小球肥大、尿白蛋白排泄增加、系膜基质扩张及足细胞损伤等变化，因此常被用于评价降糖药、肾脏保护药、抗炎药、抗纤维化药和代谢调节药。

但在正式给药前，db/db小鼠应该按照什么指标入组和随机？

一种常见做法是检测血糖，将高血糖程度接近的动物分到不同组。血糖操作方便、结果直观，也能确认糖尿病表型是否形成。

另一种做法是先检测尿白蛋白肌酐比值，也就是UACR，再按照肾损伤程度进行分层随机。

这两种方式看起来都合理，实际保护的是两类不同结论。

按血糖分组，主要保证各组糖代谢负荷接近；按UACR分组，主要保证各组给药前的肾小球滤过屏障损伤程度接近。

如果项目的核心目标是评价候选药能否降低血糖，血糖自然是重要的基线指标。

如果项目的核心目标是评价候选药能否减少蛋白尿、保护足细胞、抑制肾小球硬化或延缓糖尿病肾损伤，仅按血糖随机存在明显风险。

db/db小鼠即使血糖相近，UACR也可能存在较大个体差异。有些动物已经出现明显白蛋白尿，另一些动物仍处于较早阶段。若这些动物没有经过肾损伤分层便进入不同组，给药后的UACR差异可能主要来自基线不平衡。

模型组起始UACR偏高，后续容易出现更大的绝对下降空间；候选药组起始UACR偏低，则可能因“下降空间不足”而低估药效。反过来，候选药组基础UACR偏高，还可能因为回归均值产生看似明显的改善。

所以，糖尿病肾病db/db小鼠药效研究中，更稳妥的方案通常是：

先用血糖确认糖尿病表型，再以重复测定的基线UACR作为主要分层指标，同时平衡血糖、体重和必要的肾损伤指标。

这一设计能够同时保证糖尿病背景和肾脏病变基础，尤其适合以肾脏保护为主要开发定位的候选药。

1、高血糖形成早于稳定肾损伤

db/db小鼠携带瘦素受体功能缺陷，通常会较早出现肥胖、胰岛素抵抗和高血糖。

但糖尿病形成后，肾脏病变仍需要一定时间逐步发展。

在较早阶段，动物可能已经表现出明显高血糖，肾小球滤过屏障损伤、白蛋白尿、系膜基质扩张和足细胞丢失却尚未达到稳定水平。

因此，高血糖可以确认动物已经进入糖尿病状态，却不能单独确认糖尿病肾病已经发展到适合开展治疗性评价的阶段。

2、相近血糖不代表相近肾损伤

糖尿病肾病的进展受到多种因素共同影响，包括持续高血糖、胰岛素抵抗、肾小球高滤过、血流动力学、氧化应激、炎症反应、脂质代谢、足细胞易感性及动物遗传背景。

两只db/db小鼠可能具有接近的血糖水平，但其白蛋白尿、肾小球肥大和系膜扩张程度并不相同。

血糖主要描述代谢环境，UACR则更直接反映白蛋白穿过肾小球滤过屏障并进入尿液的程度。

两者存在联系，却不能相互替代。

3、血糖进入高平台后，分层能力可能下降

部分db/db小鼠进入明显糖尿病阶段后，血糖普遍处于较高水平。

此时动物之间虽然仍有差异，但整体分布可能集中在高值范围，单纯按照血糖随机，难以有效区分肾脏病变阶段。

肾损伤却可能继续进展，并在动物之间形成明显差异。

所以，血糖适合用于确认代谢模型成立，却未必能够为肾脏药效研究提供足够的基线分层能力。

1、确认动物具有明确糖尿病表型

血糖是db/db小鼠模型的基础表型之一。

正式入组前检测空腹或随机血糖，可以排除糖尿病表型不典型、状态异常或测定结果明显偏离本批动物分布的个体。

如果候选药主要作用于糖代谢、胰岛素敏感性或葡萄糖重吸收，血糖基线更加重要。

2、保证各组代谢负荷相近

长期高血糖是糖尿病肾损伤的重要驱动因素。

如果模型组基础血糖明显高于候选药组，即使两组UACR相近，后续模型组也可能出现更快的肾损伤进展。

所以，血糖不适合作为肾脏项目的唯一入组指标，但仍然需要进入随机平衡。

3、帮助解释候选药的降糖作用

候选药如果能够明显降低血糖，肾脏终点可能随之改善。

只有各组给药前血糖相近，后续才有条件分析血糖下降幅度与UACR、病理和肾功能改善之间的关系。

如果基础血糖已经失衡，候选药的降糖药效和肾保护药效都会受到干扰。

4、血糖检测也需要标准化

db/db小鼠的血糖会受到禁食时间、采血时间、进食状态、应激、采血部位和测定设备影响。

各组应采用相同的检测时间和采血条件。

不能一部分动物检测空腹血糖，另一部分检测随机血糖，再将结果直接用于统一分层。

对于长期药效项目，还可结合HbA1c或连续多个时间点的血糖变化，避免用单次血糖代表整个给药周期的糖暴露。

1、候选药组可能在给药前就具有更轻的肾损伤

假设模型组和候选药组血糖接近，但候选药组基础UACR明显较低。

给药结束后，候选药组UACR仍低于模型组，并不能直接说明候选药产生了肾保护。

两组的差异可能在给药前就已经存在。

如果方案没有设置基线UACR，研究者很难判断终点差异来自药物，还是来自随机分组时的肾损伤不平衡。

2、基线UACR偏高可能放大表面药效

UACR具有一定波动性。

某只动物第一次检测值异常偏高，后续即使没有接受有效治疗，也可能自然回落至其长期平均水平。

如果候选药组恰好纳入了较多一次性高值动物，终点UACR下降可能包含明显的回归均值效应。

单次终点比较无法排除这种解释。

3、不同组的疾病进展空间可能不同

基础UACR较低的组，在实验周期内可能处于蛋白尿快速上升阶段；基础UACR较高的组，可能已经进入相对稳定或接近模型上限的阶段。

两组即使接受相同处理，其自然进展轨迹也可能不同。

所以，肾脏项目需要平衡的并不只是一个终点数值，还包括动物所处的疾病阶段。

4、血糖平衡不能替代肾脏基线校正

在统计分析中加入终点血糖，无法完全补偿缺失的基础UACR。

肾损伤具有累积性和阶段性。两只动物在给药结束时血糖相同，其给药前的蛋白尿和肾脏结构损伤可能完全不同。

正式项目需要在给药前测量肾脏相关基线，而不能仅依靠终点数据事后解释。

1、UACR直接反映尿白蛋白排泄异常

尿白蛋白增加通常提示肾小球滤过屏障通透性升高，也可能受到肾小管白蛋白重吸收变化影响。

将尿白蛋白浓度除以尿肌酐，可以在一定程度上校正尿液浓缩和稀释造成的影响。

与单独检测尿白蛋白浓度相比，UACR更适合对不同动物的点尿样本进行比较。

2、UACR更贴近多数肾保护项目的药效目标

候选药如果定位于保护足细胞、修复肾小球滤过屏障、减少蛋白尿或延缓糖尿病肾病进展，UACR通常比血糖更接近核心药效问题。

按UACR分层，可以让模型组、阳性药组和候选药组从相近的蛋白尿基础开始治疗。

后续UACR变化才更容易归因于给药。

3、UACR可以用于治疗性入组

固定周龄开始给药，本质上假设同一周龄的db/db小鼠具有接近的肾损伤程度。

这一假设在实际实验中经常难以成立。

如果项目强调治疗性药效，可以先设定成模标准，待动物UACR达到实验室预设范围后再入组。

这种设计更接近“肾损伤已经形成后开始治疗”，也有助于减少预防性药效与治疗性药效混淆。

4、UACR能够提高统计分析效率

基线UACR进入随机和统计模型后，可以减少组间初始差异带来的方差。

正式分析可采用基线校正的协方差分析或包含多个时间点的混合效应模型，评价不同组UACR随时间的变化。

相比只比较终点均值，这类方法能够更充分利用纵向数据，并降低偶然基线差异对结论的影响。

1、点尿UACR存在生物学波动

动物的饮水量、尿量、进食、昼夜节律、活动、应激和排尿时间都会影响尿液组成。

即使同一只动物没有接受任何处理，不同日期检测到的UACR也可能存在明显差异。

所以，单次UACR更适合初步筛查，不适合作为高要求药效项目的唯一随机依据。

2、建议采用重复基线测量

较稳妥的方式是在正式随机前，按照统一时间窗口收集两次或多次尿样。

各次采样应保持采集方式、时间、饲养条件和检测方法一致。

随后可使用多次结果的中位数、几何均值或经过对数转换后的综合值进行分层。

具体采样间隔和次数需要结合动物状态、项目周期及实验室历史数据确定。

3、需要警惕尿肌酐带来的影响

UACR利用尿肌酐校正尿液浓度，但尿肌酐本身会受到体重、肌肉量、性别和代谢状态影响。

db/db小鼠具有明显肥胖，体重增加并不等于肌肉量同步增加。不同动物的身体组成差异可能影响尿肌酐，从而改变UACR。

因此，对于关键项目，可以同步观察尿白蛋白浓度、短时或24小时尿白蛋白排泄量，并结合UACR综合判断。

4、代谢笼采尿也有自身影响

代谢笼有利于获得一定时间内的完整尿液，但环境改变、单笼饲养和采集应激也可能影响饮水、进食、尿量及代谢状态。

正式采样前应安排适当适应，并保证各组采集条件一致。

如果仅为入组筛查，标准化点尿加重复测量往往更具可操作性；如果需要精确评价白蛋白排泄量，可以在关键时间点增加一定时长的定量采尿。

5、UACR通常呈偏态分布

少数高值动物可能显著拉高组均值。

如果直接根据原始UACR计算均值并随机，容易受到极端值影响。

正式方案可以在数据审核后采用对数转换、分位数分层或区组随机，使各组高、中、低UACR动物比例接近。

1、第一步：统一动物基础条件

首先确定db/db小鼠的遗传背景、性别、周龄、供应商、饲养条件和饮食。

同样称为db/db小鼠，不同遗传背景的肥胖、高血糖、白蛋白尿和肾脏病理进展可能存在明显差异。

正式实验不能把不同背景、不同来源或不同性别动物直接混在同一批次中。

2、第二步：确认糖尿病表型

检测血糖、体重及必要的糖代谢指标，确认动物已经形成稳定糖尿病状态。

血糖明显偏离本批总体分布、一般状态异常或存在其他疾病的动物，需要提前复核。

这一阶段主要确认模型具有糖尿病基础。

3、第三步：确认肾损伤已经进入目标阶段

在正式给药前重复检测UACR。

如果项目目标是评价已形成糖尿病肾病后的治疗作用，应确保模型动物的UACR相对于同龄db/m对照已经明显升高，并达到项目预设的入组范围。

若多数动物血糖已经很高，UACR仍接近正常，说明肾脏病变可能尚未进入合适阶段。

此时继续按血糖随机，只能完成糖尿病模型入组，无法保证糖尿病肾病模型成熟。

4、第四步：以UACR为主进行区组分层

可以按照基线UACR将动物划分为若干层级，再从每个层级中随机分配到模型组、阳性药组和候选药组。

这样可以保证各组中轻度、中度和相对重度白蛋白尿动物的比例接近。

正式随机应在盲态条件下完成，并在给药前确认各组基线UACR无明显失衡。

5、第五步：同时平衡血糖和体重

UACR完成主要分层后，还需检查各组血糖和体重。

如果某组血糖明显更高，可以在同一UACR层级内调整随机结果。

最终目标是让各组肾损伤基线相近，同时避免糖代谢负荷出现系统性差异。

6、必要时增加肾脏支持性基线

普通药效项目通常难以在给药前获得肾组织病理。

但可以根据候选药定位，增加尿KIM-1、NGAL、血清胱抑素C或其他非终末指标。

这些指标是否进入随机，需要结合模型阶段和检测稳定性确定。

指标过多也会增加随机复杂度，因此应优先保留与主要药效终点最相关、重复性较好的基线指标。

1、降低血糖本身可以改善肾脏结局

持续高血糖会增加肾小球代谢压力、氧化应激、炎症反应及糖基化终产物形成。

候选药降低血糖后，UACR、肾小球病理和分子指标均可能随之改善。

这种改善具有真实生物学价值，但无法自动证明候选药对肾脏具有独立于降糖之外的直接保护作用。

2、需要设置降糖程度匹配的参照

如果项目希望提出直接肾保护或额外肾保护，可以增加一组降糖程度接近、作用机制不同的对照治疗。

将两组血糖或HbA1c控制在相近水平后，再比较UACR、足细胞、病理和肾功能。

候选药在相近糖控制条件下仍表现出更强的肾脏改善，才更有利于支持额外肾保护作用。

3、阳性药选择需要匹配候选药定位

候选药定位为糖尿病肾病标准治疗补充时，可以考虑SGLT2抑制剂、RAS抑制剂或其他具有明确肾脏作用的药物作为参照。

候选药主要定位为降糖药时，阳性药应同时考虑降糖强度和肾脏终点。

同一个阳性药很难同时承担模型敏感性验证、降糖匹配和直接肾保护参照三项任务。

方案中需要提前定义阳性药承担的问题。

4、纵向分析血糖与UACR关系

只比较给药结束时的血糖和UACR，无法判断两者的先后关系。

建议在给药过程中设置多个血糖和UACR时间点。

如果血糖先下降，随后UACR逐渐改善，更支持代谢改善参与肾保护；如果UACR在血糖尚未明显改变时已经下降，可能提示血流动力学或肾脏直接作用。

这仍然属于机制线索，需要结合靶点和组织检测进一步验证。

5、避免简单使用终点血糖作为协变量

候选药造成的血糖下降属于药物作用的一部分。

如果统计分析中直接用终点血糖校正全部肾脏药效，可能会错误消除候选药通过降糖产生的真实肾保护。

更合理的方式是预先区分“整体肾保护效应”和“独立于降糖的额外肾保护效应”，再选择相应分组和统计策略。

1、足细胞和肾小球滤过屏障保护药

这类药物的主要目标通常包括减少白蛋白尿、维持足细胞数量及恢复裂孔膜蛋白。

UACR应作为主要入组和分层指标，血糖、体重作为重要辅助指标。

终点需结合WT1阳性足细胞数量、Nephrin、Podocin、Synaptopodin、肾小球结构和必要的电镜评价。

2、肾小球血流动力学调节药

部分药物可以较快降低肾小球内压，使UACR在短期内下降。

这种变化具有临床价值，但不能直接解释为肾小球结构已经修复。

实验需要同步检测GFR、肾小球体积、系膜基质和长期病理，区分急性血流动力学效应与持续结构保护。

3、肾小管保护药

以肾小管能量代谢、炎症、损伤或间质纤维化为主要靶点时，UACR可能无法完整反映早期药效。

这类项目仍可使用UACR作为基础分层，但应增加尿KIM-1、NGAL、肾小管病理、间质炎症及纤维化指标。

如果候选药预计主要改善肾小管而对白蛋白尿影响有限，就不应把UACR设为唯一主要终点。

4、抗炎和抗纤维化药

普通db/db小鼠在部分年龄阶段主要表现为肥胖、高血糖、白蛋白尿、肾小球肥大和系膜改变，晚期肾功能下降和广泛间质纤维化可能并不充分。

候选药若定位于逆转明显肾纤维化，仅按UACR入组仍然不够。

需要确认模型在给药前已经具备足够的纤维化和结构损伤，或者选择进展更快、更适合晚期DKD的增强模型。

5、纯降糖药

如果项目核心是比较候选药对血糖、胰岛素抵抗及代谢的作用，血糖可以成为主要随机指标。

但只要方案同时把UACR或肾脏病理作为关键开发结论，就仍应评估并平衡基线UACR。

1、UACR是重要终点，但不能代表全部肾脏损伤

UACR下降说明尿白蛋白排泄减少，通常提示肾小球滤过屏障或肾小管白蛋白处理发生改善。

它不能单独说明系膜基质、足细胞数量、肾小球硬化和间质纤维化已经同步恢复。

不同药物也可能通过血压、肾小球内压或尿液动力学快速影响UACR。

2、UACR变化需要结合病理

db/db小鼠可出现肾小球肥大和系膜基质扩张。

建议通过PAS染色评价肾小球面积和系膜基质，结合Masson或天狼星红观察胶原沉积，并根据模型阶段检测Collagen IV、Fibronectin和相关纤维化指标。

如果候选药显著降低UACR，却没有改善肾小球结构，需要谨慎界定药效层级。

3、足细胞终点能够增强蛋白尿解释

白蛋白尿与足细胞损伤密切相关。

检测Nephrin、Podocin、Synaptopodin、WT1阳性细胞数量及足突结构，有助于判断UACR改善是否伴随滤过屏障保护。

仅检测Nephrin蛋白表达仍然不够，还应结合足细胞数量、定位和组织结构。

4、需要观察肾功能和高滤过

早期糖尿病肾病可能存在肾小球高滤过，血清肌酐未必升高，甚至可能因为体型和代谢因素表现得较低。

单纯检测血清肌酐和尿素氮，对早期db/db小鼠的敏感性有限。

条件允许时，可增加更直接的GFR评估、胱抑素C、肌酐清除或其他肾功能指标。

5、终点之间不同步具有机制价值

有些候选药首先降低UACR，组织病理改善出现较晚；另一些药物可能减轻肾脏炎症和纤维化，但短期UACR变化有限。

这种不同步不应简单解释为数据矛盾。

需要根据药物作用机制、给药周期和模型阶段，判断各终点预计在什么时间出现变化。

1、第一层：代谢背景

建议动态记录体重、摄食、血糖和必要的HbA1c、胰岛素、血脂等指标。

这些数据用于描述糖尿病背景、药物代谢作用和一般耐受性。

2、第二层：尿液肾损伤指标

UACR建议在给药前和给药期间多次检测，评价药效轨迹。

条件允许时，可增加尿白蛋白排泄量、尿总蛋白、KIM-1、NGAL及其他与候选药定位相关的指标。

主要终点可以采用基线校正后的UACR变化、相对变化率或整个治疗周期的UACR曲线。

具体分析方法应在实验开始前确定。

3、第三层：肾功能

可根据模型阶段检测血清肌酐、尿素氮、胱抑素C、肌酐清除率或直接GFR。

对于早期DKD模型，应警惕血清肌酐变化不敏感，不能因为肌酐没有升高就否定肾脏损伤。

4、第四层：肾小球和足细胞病理

建议评价肾小球面积、系膜基质扩张、基底膜变化、足细胞数量和足突结构。

组织检测应采用盲法取景、统一评分和预设分析规则，减少选择性视野造成的偏差。

5、第五层：肾小管和间质损伤

根据项目机制评价肾小管上皮损伤、炎症细胞浸润、间质胶原沉积、KIM-1、NGAL、α-SMA、Collagen I、Collagen IV、Fibronectin及TGF-β相关信号。

普通db/db小鼠的间质病变程度需要在正式实验前确认，避免在模型缺少明显纤维化时评价“纤维化逆转”。

6、第六层：靶点药效学和PK/PD

候选药如果具有明确靶点，应检测肾组织靶点占有、下游信号、组织暴露及血药浓度。

UACR改善与肾组织靶点调控同步出现，能够形成更完整的药效解释。

1、遗传背景会改变肾脏易感性

不同背景的db/db小鼠在肥胖、高血糖、白蛋白尿及病理进展方面存在差异。

部分背景更容易出现早期白蛋白尿，部分背景则表现出较轻的肾脏损伤。

项目启动前需要明确具体品系，不能仅在方案中写“db/db小鼠”。

同样的周龄和血糖阈值，放在不同背景中可能对应完全不同的肾病阶段。

2、雄性和雌性不能直接混合随机

性别会影响体重、代谢、白蛋白尿和肾脏病变程度。

正式药效实验通常应选择单一性别，或者按照性别进行预设分层并保证每组比例一致。

若项目需要评价性别差异，应将性别作为独立实验因素，而不能在样本量较小的条件下简单混合分析。

3、周龄只是时间坐标，不是成模证据

固定周龄能够统一动物年龄，但无法保证每只动物的DKD进展一致。

较年轻动物可能适合研究早期预防和蛋白尿形成，年龄较大的动物更接近治疗性研究，但个体差异、死亡率和模型复杂度也可能增加。

具体给药周龄应依据本平台的血糖、UACR和病理时间序列确定。

4、供应商和饲养条件也会影响模型

饮食成分、笼养密度、环境温度、微生物环境和饲养管理均可能影响db/db小鼠的代谢状态。

不同平台照搬相同周龄和文献剂量，未必能够复制同样的肾脏表型。

正式研究前最好利用本平台历史数据或小规模预实验确认模型窗口。

1、项目要求评价晚期肾功能衰竭

普通db/db小鼠更常用于早期至中度DKD研究。

如果候选药定位为逆转明显肾小球硬化、严重间质纤维化或持续GFR下降，普通模型可能无法提供足够的疾病动态范围。

2、模型在计划周龄缺少稳定白蛋白尿

动物已经出现高血糖，但UACR与正常对照差异较小，说明肾脏模型尚未成熟或当前背景对肾损伤不够敏感。

此时延长年龄、调整品系或选择增强型模型，比继续按血糖入组更合理。

3、候选药主要针对肾间质纤维化

若模型中纤维化程度很轻，即使候选药机制成立，也很难显示明确的逆转空间。

可以考虑单肾切除db/db、eNOS缺失db/db或其他具有加速肾损伤特征的模型，但需要同时评估增强因素是否改变候选药的临床解释。

4、候选药需要评价非肥胖型糖尿病肾病

db/db小鼠同时存在瘦素受体缺陷、肥胖和严重代谢异常。

如果目标人群或药物机制与该背景不匹配，可以考虑HFD-STZ、KK-Ay、BTBR ob/ob或其他模型。

模型选择应服务于候选药的目标产品定位，不能因为db/db使用普遍便默认适合所有DKD项目。

1、只按血糖随机，不检测基础UACR

这种设计能够保证糖尿病表型，无法保证各组肾损伤程度相近。

2、只测一次UACR便直接入组

单次高值或低值可能造成分层错误和回归均值。

3、按终点UACR判断药效，不报告基线

缺少基础值后，无法判断终点差异是否在给药前已经存在。

4、把血糖下降后的全部肾脏改善都写成直接肾保护

降糖本身可以带来真实肾脏获益。直接肾保护需要降糖匹配对照或更完整的机制证据。

5、UACR下降后便宣称肾纤维化逆转

蛋白尿、血流动力学、足细胞损伤和组织纤维化的时间变化并不完全同步。

6、普通db/db小鼠没有明显纤维化，却设置大量抗纤维化终点

模型病变不足会压缩候选药的药效窗口。

7、只检测血清肌酐和尿素氮

早期模型中这两个指标可能缺乏足够敏感性，需要结合UACR、GFR和病理。

8、忽略UACR的偏态分布

少数极高值动物可能主导均值和统计结果。入组与分析应考虑对数转换或稳健统计方法。

9、不同时间点采用不同采尿方式

基线使用点尿，终点使用24小时尿液，或者各组采集时间不一致，都会降低纵向可比性。

10、按体重平衡后默认代谢基础已经一致

db/db小鼠的体重主要反映肥胖程度，不能替代血糖、UACR和肾脏病变指标。

11、器官系数直接使用肾重除以体重

db/db小鼠肥胖明显，体重作为分母可能使肾脏相对重量被低估。应结合绝对肾重、体长或胫骨长度及组织学结果综合解释。

12、给药前没有确认模型处于稳定进展阶段

如果UACR正在快速自然上升或波动，短周期药效可能受到模型动力学影响。

糖尿病肾病db/db小鼠项目的难点，不只是获得高血糖动物，还包括确认肾损伤窗口、重复测定UACR、进行基线分层随机，以及区分降糖作用、血流动力学作用和直接肾保护作用。

博恩生物可根据候选药的作用机制、目标产品定位、给药周期和预期开发结论，设计db/db小鼠糖尿病肾病药效评价方案。

在模型筛选层面，可根据项目需要确定db/db小鼠遗传背景、性别、周龄和实验周期，并通过血糖、体重、UACR及必要的肾脏指标确认模型是否进入目标阶段。

在入组和随机层面，可采用重复UACR测定，以基线UACR为主要分层指标，同时平衡血糖、体重和其他关键指标，减少肾损伤基线不一致对药效结论的影响。

在给药设计层面，可根据候选药定位设置预防性或治疗性给药、低中高剂量、降糖匹配对照、肾保护阳性药及必要的联合用药组。

对于具有明显降糖作用的候选药，可进一步设计降糖效应与直接肾脏作用的拆分方案。

在尿液和肾功能评价层面，可开展UACR、尿白蛋白排泄、尿总蛋白、KIM-1、NGAL、血清肌酐、尿素氮、胱抑素C及相关肾功能检测。

在组织病理层面，可开展HE、PAS、Masson、天狼星红及相关免疫组化，评价肾小球肥大、系膜基质扩张、足细胞损伤、肾小管损伤、炎症和纤维化。

在足细胞和分子机制层面，可围绕WT1、Nephrin、Podocin、Synaptopodin、Collagen IV、Fibronectin、α-SMA、TGF-β及候选靶点开展免疫荧光、WB、qPCR和机制验证。

在药代和药效学层面，可根据项目需要检测血浆及肾组织药物暴露、靶点占有和下游信号，建立候选药剂量、暴露、血糖变化、UACR和组织药效之间的关系。

在统计分析层面，可结合基线UACR、纵向重复测量和预设主要终点进行分析，避免只比较终点均值造成药效高估或低估。

对于普通db/db小鼠病变深度不足的项目，博恩生物也可根据目标终点评估是否需要调整动物年龄、延长实验周期，或采用单肾切除、eNOS相关及其他加速型糖尿病肾病模型。

糖尿病肾病db/db小鼠模型中，按血糖入组和按UACR入组并非只能二选一。

血糖用于确认糖尿病背景和代谢负荷，UACR用于确认肾脏损伤和蛋白尿基础。

当项目核心是肾脏药效时，更稳妥的设计是以重复测定的UACR作为主要分层指标，再平衡血糖、体重和必要的肾脏支持性指标。

这套设计能够降低基线不平衡、回归均值和疾病阶段差异对结果的干扰。

候选药最终需要回答的，也不只是能否把血糖和UACR降下来。

更关键的问题是：在相近的糖尿病和肾损伤基础上，候选药能否持续减少蛋白尿、保护足细胞、改善肾小球和肾小管病理，并形成与暴露和靶点作用相匹配的肾脏药效证据。