1. 引言

微卫星不稳定高（MSI-H）和错配修复缺陷（dMMR）是结直肠癌中具有特殊临床意义的分子亚型。MSI-H/dMMR 肿瘤通常具有高突变负荷（TMB），富含新抗原，能够显著激活免疫系统，对免疫检查点抑制剂（ICIs）尤其敏感。临床前模型在评估 MSI-H/dMMR 背景下药物疗效、免疫激活及耐药机制中起着关键作用。通过精确选择适合的细胞系和模型类型，可以为临床转化提供可靠实验数据。

2. 代表性细胞系与模型选择

2.1 人源 MSI-H/dMMR 细胞系

常用细胞系包括 HCT116、RKO 和 LoVo。HCT116 是广泛应用的 MSI-H 模型，适合 DNA 损伤、PI3K 通路、化疗和免疫相关机制研究。RKO 适合研究 BRAF 突变、MSI-H 和高突变负荷背景下的免疫治疗效果。LoVo 在高侵袭性和转移相关研究中表现突出。通过合理选择这些细胞系，可以覆盖免疫疗法早筛和机制研究的不同需求。

2.2 模型类型选择

• 皮下 CDX 模型：适合早期药效 PoC、剂量探索及 PK/PD 研究，可用于 MSI-H 药物组合初步筛选。

• 原位模型：模拟肠道微环境，便于研究肿瘤免疫浸润和局部 TME 重塑。

• 同种免疫完整模型：CT26/MC38 模型在 BALB/c 或 C57BL/6 小鼠中建立，可评估完整免疫系统下的药效。

• 人源化免疫模型：适用于 TCE、CAR-T 或双抗等依赖人免疫系统的机制验证。

3. 模型优势

3.1 高突变负荷与免疫相关性

MSI-H/dMMR 模型具有丰富的新抗原，能有效激活 CD8+ T 细胞和其他效应免疫细胞。通过流式细胞术、单细胞测序和免疫组化，可以准确评估肿瘤微环境中免疫细胞浸润、PD-L1 表达及炎症状态，为免疫疗法策略提供定量数据。

3.2 药物筛选与联合策略验证

MSI-H/dMMR 模型可用于免疫检查点抑制剂单药或联合治疗的早筛。皮下 CDX 模型可进行快速剂量排序，原位和同种原位模型适合研究局部 TME 对药物的影响，评估联合小分子、ADC 或化疗与免疫治疗的协同作用。

3.3 临床相关性高

MSI-H/dMMR 背景与高 TMB 和 PD-1 抑制剂敏感性高度相关，模型结果可直接映射到临床免疫治疗策略，包括早期药物组合设计、耐药机制探索及术后维持治疗评估。

4. 模型建立与操作

4.1 皮下 CDX 建模

HCT116、RKO 或 LoVo 细胞注射至免疫缺陷小鼠皮下，肿瘤达到 80–150 mm³ 后随机分组。实验周期通常 2–4 周，可延长至 4–8 周进行耐药或撤药再挑战实验。核心终点包括肿瘤抑制率（TGI）、终末瘤重、体重变化及免疫相关机制指标。

4.2 原位建模

将 luc 标记的 MSI-H/dMMR 细胞注射至盲肠或结肠壁，通过 IVIS 或肠镜进行动态监测。该方法可观察局部侵袭、肠壁浸润和微小残留病灶的发展，为免疫药物作用提供更真实的器官微环境背景。

4.3 同种与人源化模型

• 同种模型：CT26-luc 或 MC38-luc 建模于免疫完整小鼠，可观察完整免疫系统对药物的响应，适合早筛和机制研究。

• 人源化模型：通过 huPBMC 或 huHSC 重建人免疫系统，适合依赖人 T 细胞的药物验证，如双抗或 CAR-T。重建周期长，但能够模拟人类免疫微环境及长期药物作用。

5. 检测指标

• 免疫机制：CD8+/CD4+      T 细胞比例、Tregs、NK 细胞、肿瘤相关巨噬细胞分布

• 肿瘤负荷：IVIS 生物发光、体积、终末瘤重

• 分子标志物：PD-L1 表达、TMB、MSI 状态、ctDNA      水平

• 药效评价：TGI、RTV、肿瘤消退情况、生存分析

• 微环境分析：血管生成、炎症细胞浸润、细胞因子谱

6. 应用示例

6.1 免疫检查点抑制剂评估

在 HCT116-luc 或 RKO-luc 原位模型中，PD-1/PD-L1 抑制剂能够显著抑制肿瘤生长，同时增强 CD8+ T 细胞浸润。结合单细胞测序，可以揭示耐药机制及潜在联合治疗靶点。

6.2 联合策略探索

MSI-H 模型可用于化疗或小分子联合免疫治疗的效果评估。例如，PARP 抑制剂与 PD-1 抑制剂联合使用时，可通过 TME 重塑及肿瘤负荷变化，验证协同作用。

6.3 抗耐药机制研究

通过长期观察皮下或原位 MSI-H 模型，可研究免疫耐药机制，如免疫抑制性细胞累积、PD-L1 上调及微环境适应，为下一代免疫药物开发提供依据。

7. 局限性与注意事项

MSI-H/dMMR 模型虽高突变负荷、免疫相关性强，但人源细胞在免疫缺陷小鼠中建立时，无法完全反映完整免疫系统，需要结合同种或人源化模型验证。人源化模型成本高、周期长、供者差异显著，需要在实验设计中充分考虑。

8. 总结

MSI-H/dMMR 模型以其高突变负荷和免疫相关性，为免疫治疗及机制研究提供了可靠实验平台。结合皮下、原位、同种及人源化模型，可以实现从早期药效筛选到机制深入探索的全链路验证，为 MSI-H/dMMR 结直肠癌药物开发提供高临床相关性支持。