胰腺导管腺癌动物实验研究用户指南

导读

一、指南总览
二、细胞系库与分子分层特征
三、皮下异种移植模型（CDX）
四、胰腺原位模型
五、转移模型
六、同种免疫完整模型
七、人源化免疫模型
八、复发与微小残留病灶模型
九、项目升级路径建议
十、检测指标与阳性药体系
十一、优势、局限与总体建议

一、指南总览

胰腺导管腺癌动物模型的选择，不宜仅按皮下、原位和转移等技术路径进行划分，更应围绕分子分层、器官微环境、间质屏障、转移方式和免疫场景进行组合式设计。对于胰腺导管腺癌项目，皮下异种移植模型更适合早期药效评估、剂量探索和 PK/PD 研究；胰腺原位模型更适合回答器官微环境、局部侵袭、肿瘤渗透、神经周围浸润和术后复发等问题；肝转移与腹膜播散模型更适合评估肿瘤定植、微小残留病灶和抗播散策略；同种免疫完整模型则是免疫治疗、TME 重塑、局部治疗和联合策略研究中的高优先级平台。对胰腺癌而言，转化价值的关键通常在于药物能否在高纤维化、低灌注、免疫抑制显著的胰腺环境中持续发挥作用，而非只观察是否出现单纯缩瘤。

从临床转化路径看，胰腺导管腺癌目前仍以 FOLFIRINOX、吉西他滨联合白蛋白紫杉醇作为核心化疗参考体系；gBRCA 或 PALB2 相关项目可引入 PARP 抑制剂开展维持或联合研究；KRAS 方向项目需要重点强调特定突变背景及其下游联用策略；局部递送、消融、放疗或栓塞联合项目，则应尽早进入原位和转移模型平台。对于前沿研发，RMC-6236、daraxonrasib、quemliclustat、CEND-1 等更适合作为在研参考药或机制参考，不宜直接作为标准上市阳性药。总体上，胰腺导管腺癌更适合采用“皮下早筛—胰腺原位验证—肝转移或腹膜播散深化—免疫确认”的递进式研究路线。

二、细胞系库与分子分层特征

2.1 KRAS 突变与间质型代表性细胞系

在胰腺导管腺癌研究中，常用的人源细胞系包括 PANC-1、MiaPaCa-2、AsPC-1、BxPC-3、Capan-1 和 CFPAC-1。其中，PANC-1 与 MiaPaCa-2 是 KRAS 突变、间质型和高侵袭背景中最常用的基础模型，适合用于小分子、KRAS 下游联用、纳米递送和局部治疗的早期筛选。若项目目标聚焦 KRAS 通路、CAF 互作、EMT 或高纤维化背景下的药效验证，PANC-1 与 MiaPaCa-2 通常优先级更高。

2.2 分泌型与 DDR 相关代表性细胞系

Capan-1 是 BRCA2 相关和分泌型 PDAC 项目中的高优先级模型，适合 DNA 损伤修复、铂类敏感、PARP 联合和长期维持类研究。CFPAC-1 也常用于分泌型和高转移方向的补充研究。若项目聚焦 BRCA、PALB2、HRD、铂敏感维持或 PARP 联合，建议同步纳入 Capan-1 这类更能代表 DDR 特征的模型，而不应仅依赖 PANC-1 或 MiaPaCa-2。

2.3 KRAS 野生型与 EGFR 依赖代表性细胞系

BxPC-3 是 KRAS 野生型、EGFR 依赖方向中最常用的基础模型之一，适合抗 EGFR、双抗、ADC 及部分细胞毒药研究。若项目聚焦 KRAS 野生型分层、EGFR 相关策略或目标抗原表达更稳定的抗体项目，BxPC-3 的优先级较高。

2.4 高转移代表性细胞系

AsPC-1、CFPAC-1 和 MiaPaCa-2 更适合用于肝转移、腹膜播散和高侵袭方向的研究。其中，AsPC-1 是胰腺癌转移项目中使用频率较高的人源模型之一，适合原位自发转移、肝定植和腹膜播散；MiaPaCa-2 则兼具 KRAS 突变背景和较好的原位扩展能力。若项目目标涉及抗转移、抗定植、微小残留病灶或围手术期治疗，建议在选株阶段即优先考虑 AsPC-1、MiaPaCa-2 或荧光素酶标记的高转移株。

2.5 同种与免疫完整模型代表株

在免疫完整平台中，Pan02、Panc02、Pan02-luc、KPC 来源细胞和 KPC-luc 是最关键的基础模型。针对免疫治疗、局部治疗、TME 重塑和器官微环境相关问题，同种原位模型通常优先于同种皮下模型。C57BL/6 背景常用于 Pan02 或 KPC 系；若项目更加重视完整免疫系统与原位土壤的结合，建议优先使用荧光素酶标记株，以便持续观察微小残留病灶与复发过程。

三、皮下异种移植模型（CDX）

皮下 CDX 是胰腺导管腺癌最稳健的早期药效平台，适合开展概念验证、剂量探索、PK/PD 研究以及不同分子或载体体系的横向排序。其主要优势在于操作标准化、重复性较高、成本相对较低，适合快速比较小分子、细胞毒药、ADC、纳米药和部分靶向药。其局限在于难以真实反映胰腺高纤维化间质、低灌注、免疫抑制、神经周围浸润和肝转移等特征，因此不宜单独作为免疫治疗、抗转移、术后复发或局部治疗项目的决策依据。

3.1 KRAS 突变与间质型皮下 CDX

PANC-1 或 MiaPaCa-2 联合 BALB/c nude 或 NSG 小鼠，可作为 KRAS 通路、小分子抑制剂、ADC、纳米递送和局部制剂的早期筛选模型。常规做法为皮下接种 1×10^6 至 5×10^6 个细胞，待肿瘤达到 80 至 150 mm3 后随机分组。治疗周期通常为 2 至 4 周；若研究耐药、停药后再挑战或长期持续给药，可延长至 4 至 8 周。检测指标宜包括 TGI、RTV、终末瘤重和体重，并结合 Ki67、cleaved caspase-3、pERK、pS6 及药物组织分布等机制终点。阳性对照可选吉西他滨、白蛋白紫杉醇、FOLFIRINOX 等效方案；KRAS 项目可加入相应抑制剂或下游联用对照。

3.2 分泌型与 DDR 相关皮下 CDX

Capan-1 或 CFPAC-1 联合 BALB/c nude 或 NSG 小鼠，适合 BRCA、PALB2、HRD、铂类敏感、PARP 抑制剂及维持治疗方向研究。Capan-1 更适合 DDR 相关项目和长期给药设计，CFPAC-1 可作为高转移与分泌型背景的补充。阳性对照通常可选择吉西他滨、铂类及 PARP 抑制剂。若项目聚焦 BRCA 或 PALB2，建议至少纳入一个 DDR 代表株，以提高模型的针对性。

3.3 KRAS 野生型与 EGFR 依赖皮下 CDX

BxPC-3 联合 BALB/c nude 或 NSG 小鼠，适合 KRAS 野生型、EGFR 依赖、抗体或 ADC 项目的早期筛选。该模型常用于目标抗原表达较稳定的抗体类项目，也适合与 KRAS 突变模型并行比较。阳性对照可选吉西他滨、白蛋白紫杉醇；若项目涉及 EGFR 或受体依赖机制，还可加入相应受体通路对照。

3.4 高转移皮下 CDX

AsPC-1、MiaPaCa-2 或 CFPAC-1 联合 BALB/c nude、NOD-SCID 或 NSG 小鼠，适合高侵袭、抗转移、局部递药和晚期项目的前期筛选。AsPC-1 更适合后续升级到肝转移和腹膜播散模型，MiaPaCa-2 则适合原位扩展与转移前期研究。若项目目标涉及转移或复发，皮下阶段更适合作为初筛平台，后续仍需升级至更具临床相关性的模型。

四、胰腺原位模型

胰腺原位模型是胰腺导管腺癌项目中最关键的高价值平台之一。与皮下模型相比，原位模型更能真实呈现胰腺器官环境、纤维化间质、低灌注、局部神经血管关系、胰周浸润以及肝转移早期过程。对于局部治疗、纳米递送、药物渗透、放疗、介入治疗、CAF 或 TME 重塑以及术后复发研究，原位模型的优先级明显高于皮下模型。其主要局限在于建模手术要求较高、死亡率和批间差异较大，通常需要结合荧光素酶标记、IVIS 或超声进行监测。

4.1 人源原位模型

PANC-1-luc、MiaPaCa-2-luc、AsPC-1-luc、BxPC-3-luc 或 Capan-1-luc 联合 NSG 或 NOD-SCID 小鼠，适合用于器官微环境、局部侵袭、局部给药、肿瘤渗透、纤维化间质和术后复发研究。造模时，可将荧光素酶标记细胞或小肿瘤块接种于胰尾或胰体，必要时术中联合 Matrigel 或缝扎固定以减少泄漏。PANC-1-luc 与 MiaPaCa-2-luc 更适合 KRAS 或间质型背景和药物渗透研究；Capan-1-luc 更适合 DDR 方向；AsPC-1-luc 更适合自发肝转移与腹膜播散研究。检测时宜关注原位肿瘤负荷、肝转移、腹膜播散、腹水、超声或 IVIS 信号、生存以及 CA19-9、Ki67、αSMA、collagen、CD31、CD8/FoxP3 等指标。

4.2 同种原位模型

Pan02-luc 或 KPC-luc 联合 C57BL/6 小鼠，适合用于免疫治疗、局部治疗、TME 重塑、转移研究和术后复发研究。该模型兼具器官微环境和完整免疫系统，是 PDAC 免疫项目中的高优先级平台。若项目涉及 PD-1、CTLA-4、STING、细胞因子、T 细胞或 NK 疗法、局部治疗联合或放疗联合，建议优先选择同种原位模型。

五、转移模型

在胰腺导管腺癌转移模型中，肝转移和腹膜播散具有较高的临床相关性。肝转移模型更适合回答药物是否能够抑制肝定植以及肝微环境中的持续生长；腹膜播散模型更适合评估药物对腹腔播散、结节形成和腹水变化的影响。实验性转移模型更适合研究定植过程，原位自发转移模型则更接近临床自然病程。

5.1 肝转移模型

AsPC-1、MiaPaCa-2、Pan02 或 KPC 系联合裸鼠、NSG 或 C57BL/6 小鼠，可用于肝定植、肝靶向递药、抗黏附、抗微环境重塑和微小残留病灶研究。实验性造模可采用半脾、脾内或门静脉注射；若项目更强调临床相关性，建议优先采用胰腺原位后的自发肝转移模型。脾内或门静脉模型成功率较高、周期较短，更适合比较肝定植抑制能力；原位自发肝转移模型更适合回答从原发灶到肝转移的全过程问题。常用检测指标包括肝转移结节数、肝重量、影像学信号、生存和病理结果。对于抗转移、抗定植和术后最小残留病灶项目，原位自发转移或切除后复发模型通常更具价值。

5.2 腹膜播散模型

AsPC-1、Pan02、KPC 系或 MiaPaCa-2 联合裸鼠、NSG 或 C57BL/6 小鼠，适合腹腔局部治疗、腹腔灌注、缓释装置、纳米递送和抗播散策略研究。常见造模方式包括腹腔注射肿瘤细胞，或由胰腺原位模型进展形成腹膜播散。该模型较适合评价腹腔灌注、纳米药、局部缓释装置和抗播散策略，但由于肿瘤负荷异质性较大，需要建立标准化评分体系。常用检测指标包括腹膜结节数、类 PCI 评分、腹水量、生存和器官受累情况。若项目目标是播散抑制或腹腔局部治疗，建议直接采用腹膜播散模型进行评估。

5.3 原位自发转移模型

AsPC-1-luc、MiaPaCa-2-luc、Pan02-luc 或 KPC-luc 胰腺原位模型，适合开展原发灶至肝转移或腹膜播散的全流程研究，以及围手术期治疗和长期维持治疗研究。该模型更接近临床自然病程，但实验周期更长、个体变异更大。若项目涉及抗转移、抗定植或围手术期治疗，建议在实验性转移模型之外，增加原位自发转移设计。

六、同种免疫完整模型

同种免疫完整模型的核心价值在于保留完整免疫系统，因此在免疫检查点、STING、细胞因子、放疗联合、细胞治疗和 TME 重塑研究中具有不可替代性。胰腺导管腺癌属于典型的免疫抑制型肿瘤，若仅依赖异种皮下模型，往往会低估间质和免疫微环境对结果的影响。对于免疫治疗项目，在获得初步阳性结果后，尽快升级至同种原位或转移模型进行验证，是提高转化判断可靠性的关键原则。

6.1 同种皮下模型

Pan02 或 KPC 来源细胞联合 C57BL/6 小鼠，适合用于免疫检查点、STING、细胞因子、联合治疗和初步 PK/PD 研究。常规方法为同品系鼠源细胞皮下接种，待肿瘤达到 50 至 100 mm3 后随机分组。治疗周期通常为 10 至 21 天；由于同种瘤生长较快，免疫治疗往往需要较早起始，并持续监测体重与伪进展。检测指标可包括肿瘤体积、生存、体重、流式免疫分型、细胞因子以及 IHC 或空间免疫结果。该模型适合免疫早筛，但命中后建议尽快升级至同种原位或转移模型。

6.2 同种原位模型

Pan02-luc 或 KPC-luc 联合 C57BL/6 小鼠，主要用于免疫治疗、局部治疗、TME 重塑、转移研究和术后复发研究。该模型兼具器官微环境和完整免疫系统，是胰腺癌免疫治疗项目中的高优先级平台。检测时可重点关注原位肿瘤负荷、肝转移、腹膜播散、生存、免疫浸润、单细胞分析、流式结果和 TCR 谱。阳性对照可选吉西他滨、白蛋白紫杉醇、FOLFIRINOX 等效方案，必要时可联合 PD-1、CTLA-4、STING 或放疗等机制性对照。

七、人源化免疫模型

人源化模型适合回答普通 CDX 和同种模型均难以充分解释的问题，尤其适用于双抗、TCE、CAR-T、NK、人源细胞因子以及依赖人免疫系统效应的抗体或 ADC 项目。对 PDAC 而言，这类模型通常不用于高通量早筛，更适合关键节点验证和机制确认。

7.1 huPBMC 联合人源 PDAC 模型

该模型适合短周期免疫治疗、双抗和细胞治疗验证，常用细胞包括 PANC-1、MiaPaCa-2、BxPC-3、AsPC-1 和 Capan-1。其优势在于建模速度较快，适合观察短程药效、免疫激活和细胞因子释放结果；其局限在于 xGvHD 风险较高、治疗窗口较短，更适合开展 2 至 4 周实验。若项目涉及双抗、CAR-T、NK 或依赖人免疫系统效应的 ADC，可优先采用该平台进行短周期验证。

7.2 huHSC 联合人源 PDAC 模型

该模型适合长周期人免疫重建、复杂联合和微环境机制研究。其特点是人免疫系统重建更完整，适合持续性免疫治疗、耐药演化和复杂联合研究，但实验周期较长、成本较高、供者差异较明显。该平台更适合候选药确认阶段，不宜作为首轮筛选平台。

八、复发与微小残留病灶模型

8.1 推荐模型与应用场景

若胰腺导管腺癌项目涉及切除后复发、围手术期治疗、微小残留病灶或肝转移再发，单纯皮下模型通常难以满足研究需求。更推荐采用胰腺原位模型，在原发灶形成后实施手术切除，再持续追踪局部复发和肝转移。推荐模型包括 Pan02-luc、KPC-luc、AsPC-1-luc 和 MiaPaCa-2-luc。此类模型尤其适合围手术期治疗、术后维持治疗、微小残留病灶清除和抗转移策略研究。

九、项目升级路径建议

9.1 KRAS 通路、小分子与 ADC 项目

建议采用 PANC-1、MiaPaCa-2 或 BxPC-3 皮下 CDX 进行早筛，再进入胰腺原位模型验证器官相关性，必要时进一步加入肝转移或腹膜播散模型。若项目属于 KRAS 抑制剂或下游联用方向，应优先保证突变背景准确以及信号通路检测结果可靠。RMC-6236 和 daraxonrasib 更适合作为前沿研发参考，不宜直接视作标准上市阳性药。

9.2 DDR、BRCA 与 PALB2 项目

建议采用 Capan-1 或 CFPAC-1 皮下模型进行早筛，再通过原位模型验证，必要时增加切除后复发或肝转移设计。若项目聚焦铂类敏感维持、PARP 联合或 DDR 相关耐药，建议优先纳入 DDR 代表株，以增强模型的生物学匹配度。

9.3 免疫治疗与 TME 重塑项目

建议先以 Pan02 或 KPC 皮下同种模型开展早筛，再进入 Pan02-luc 或 KPC-luc 原位模型验证，必要时进一步进入肝转移或复发模型。PDAC 免疫项目若仅停留在皮下模型阶段，通常难以充分支撑转化判断，因此需要结合原位间质、免疫抑制和转移场景综合评价。

9.4 局部递送、放疗与介入项目

建议优先采用人源或同种胰腺原位模型，必要时再叠加腹膜播散、肝转移或术后复发模型。对于局部给药、缓释装置、消融和放疗联合研究，皮下模型只能提供有限参考，原位模型更适合作为主要决策平台。

十、检测指标与阳性药体系

10.1 通用检测指标

皮下模型的核心终点包括 TGI、RTV、类 ORR 分层、体重和终末瘤重。原位模型的核心终点包括原位胰腺肿瘤负荷、生存、肝转移、腹膜播散、腹水以及超声或 IVIS 结果。转移模型的核心终点包括肝转移结节数、类 PCI 评分、腹水量和生存。免疫模型的机制终点包括单细胞分析、流式分型、TCR 谱、细胞因子和空间免疫。常用机制终点还包括 CA19-9、Ki67、αSMA、collagen、CD31、CD8/FoxP3 及药物组织分布。

10.2 阳性药推荐

通用化疗可选择吉西他滨、白蛋白紫杉醇和 FOLFIRINOX 等效方案。DDR、BRCA 或 PALB2 方向可选择 PARP 抑制剂。KRAS 项目可根据研究对象加入相应 KRAS 抑制剂或下游联合方案。局部递送、放疗和介入项目可增加消融、栓塞或放疗联合对照。RMC-6236、daraxonrasib、quemliclustat 和 CEND-1 等前沿在研药更适合作为研发参考药，不宜直接作为标准上市阳性药。

十一、优势、局限与总体建议

11.1 皮下 CDX

皮下 CDX 的优势在于标准化程度高，适合高通量早筛和 PK/PD 研究；其局限在于对胰腺间质、渗透屏障、转移和术后复发的外推能力有限。

11.2 胰腺原位模型

胰腺原位模型更接近真实器官环境，适合研究局部侵袭、药物渗透、转移和复发；其局限在于手术复杂、实验通量较低且变异更大。

11.3 肝转移与腹膜播散模型

肝转移与腹膜播散模型有助于精准回答肝定植、腹腔播散和微小残留病灶等问题；其局限在于实验性模型仍无法完全替代自然病程，同时评分体系需要严格标准化。

11.4 同种免疫完整模型

同种免疫完整模型可评估完整免疫系统和 TME 重塑，尤其适合免疫治疗与局部治疗联合研究；其局限在于鼠源肿瘤与人源肿瘤之间仍存在生物学差异。

11.5 人源化模型

人源化模型适合验证人免疫依赖机制，尤其适用于双抗、TCE 和细胞治疗；其局限在于成本较高、供者差异较大且 xGvHD 风险明显。

总体来看，胰腺导管腺癌动物模型的关键在于能否选用最能回答当前科学问题的模型，模型数量本身并非核心判断标准。对于 KRAS 和常规小分子项目，皮下模型通常可完成第一轮排序；对于 DDR、局部递送、放疗和高纤维化间质项目，应尽快升级至胰腺原位平台；对于转移、复发和围手术期项目，则应进一步进入肝转移、腹膜播散和切除后复发模型；对于免疫治疗项目，应坚持同种原位优先的原则。综合而言，建议采用“皮下早筛—原位验证—转移深化—免疫确认”的递进式路径，以提高模型结果对胰腺导管腺癌临床开发的支持价值。