胃癌 / 胃食管结合部腺癌动物实验研究用户指南

第一章 指南总览

胃癌 / 胃食管结合部腺癌动物模型的选择，不能只按“皮下、原位、转移”做技术分类，更应围绕病理类型、分子分层、器官微环境、播散方式和免疫场景进行组合式选型。对该适应症而言，皮下异种移植模型更适合早期药效、剂量探索和 PK/PD；胃壁原位模型更适合回答器官微环境、胃壁浸润、局部侵袭、局部递药和术后复发问题；腹膜播散模型是评估腹腔播散、腹水和局部灌注治疗的核心平台；肝转移模型则更适合回答肝定植、肝靶向递药和晚期器官转移问题。对于 ADC、双抗、CAR-T、局部给药、术后复发和抗转移策略，不能停留在单一皮下模型上。

从当前临床开发路径看，胃癌 / 胃食管结合部腺癌已经形成较明确的靶点分层。HER2 阳性项目更强调 HER2 依赖、抗 HER2 联合和后线 ADC；CLDN18.2 项目更强调膜表达强度、表达稳定性和腹膜播散场景；FGFR2b 项目更强调富集人群与器官相关性；免疫方向则需结合 PD-L1、MSI-H / dMMR 和围手术期治疗场景。近年来的治疗映射也已发生明显更新：zolbetuximab 已进入一线 HER2 阴性、CLDN18.2 阳性晚期胃癌 / GEJ 腺癌；pembrolizumab 联合 trastuzumab 和含铂含氟嘧啶化疗已成为 PD-L1 CPS≥1 的 HER2 阳性晚期胃癌 / GEJ 腺癌一线标准参考；围手术期场景中，durvalumab 联合 FLOT 也已进入可切除胃癌 / GEJ 腺癌治疗路径。基于这些变化，模型体系更适合采用“皮下早筛—胃壁原位验证—腹膜播散 / 肝转移深化—免疫确认”的递进式路线。

第二章 胃癌 / 胃食管结合部腺癌细胞系库与分子分层特征

2.1 HER2 阳性代表性细胞系

HER2 阳性项目优先考虑 NCI-N87。该细胞系是胃癌领域最经典的 HER2 阳性模型之一，适合 trastuzumab、抗 HER2 ADC、HER2 双抗及联合化疗研究。若项目目标是 HER2 阳性晚期胃癌 / GEJ 腺癌，应优先保证 HER2 表达稳定性、膜表达一致性和体内成瘤后靶点不丢失。对于后线 ADC、双抗或放射性偶联药物，NCI-N87 通常是首选早期平台。

2.2 CLDN18.2 高表达代表性细胞系

CLDN18.2 项目优先考虑 MKN45、NUGC-4。其中，MKN45 是应用最广的 CLDN18.2 方向基础模型之一，也适合腹膜播散和原位模型扩展；NUGC-4 常用于高 CLDN18.2 表达、原位和播散相关研究。若项目是 CLDN18.2 抗体、ADC、双抗或 CAR-T，应在体外和体内都确认 CLDN18.2 膜表达水平，并优先选用病理相关性和表达稳定性更好的模型。

2.3 FGFR2b 代表性细胞系

FGFR2b 方向建议优先使用 SNU-16、KATO III。这类细胞系更适合 FGFR2b 抗体、双抗或 ADC 方向的基础药效评价，也适合作为 FGFR2b 富集型胃癌项目的早期标准平台。若项目目标是 FGFR2b 相关策略，不应只做通用胃癌细胞，而应优先使用目标表达更明确的株系。

2.4 弥漫型 / 低分化 / 高侵袭代表性细胞系

对于弥漫型、低分化、高侵袭和播散方向，优先考虑 HGC-27、MKN45。HGC-27 更适合高侵袭、迁移和晚期播散研究；MKN45 既适合 CLDN18.2 项目，也适合胃壁原位、腹膜播散和肝转移前期平台。若项目需要回答“药物是否能覆盖更高恶性程度、浸润更深或更易播散的人群”，不宜只使用 NCI-N87 或 SNU-16，应同步配置 HGC-27 或 MKN45。

2.5 细胞系选型总原则

HER2 项目优先保证 HER2 表达稳定性；CLDN18.2 项目优先保证膜表达和病理相关性；FGFR2b 项目优先保证靶点富集；弥漫型和高侵袭项目优先考虑原位和播散能力。若项目涉及 ADC、双抗或细胞治疗，除靶点表达外，还必须考虑原位场景和腹膜播散场景中的真实暴露与药物可及性。

第三章 皮下异种移植模型（CDX）

皮下 CDX 是胃癌 / 胃食管结合部腺癌最稳健的早期药效平台，适合药效 PoC、剂量探索、PK/PD 关联和不同候选药物的横向排序。其优势是标准化程度高、重复性好、成本较低，适合快速比较小分子、细胞毒药、抗体、ADC 和纳米药；其局限是不能真实反映胃壁微环境、局部侵袭、腹膜播散、肝转移和术后复发，因此不宜单独作为抗转移、局部给药或免疫治疗项目的成败依据。

3.1 HER2 阳性皮下 CDX

NCI-N87 + BALB/c nude 或 NSG
模型定位：适合 HER2 靶向药、ADC、双抗和联合方案的早期药效筛选。
造模方法：常规皮下接种，肿瘤达到约 80–150 mm3 后随机分组。
治疗周期：通常 2–4 周；若研究耐药、撤药再挑战或长期靶向抑制，可延长至 4–8 周。
检测指标：TGI、RTV、终末瘤重、体重；机制终点建议包括 HER2、Ki67、cleaved caspase-3、药物组织分布。
阳性药推荐：trastuzumab；后线 HER2 阳性项目可加入 trastuzumab deruxtecan 作为高优先级映射参考。

3.2 CLDN18.2 高表达皮下 CDX

MKN45 / NUGC-4 + BALB/c nude 或 NSG
模型定位：适合 CLDN18.2 抗体、ADC、双抗和细胞治疗项目的早期药效与 PK/PD。
特点：MKN45 更适合后续升级到原位、腹膜播散和肝转移模型；NUGC-4 更适合 CLDN18.2 高表达稳定验证。
阳性药推荐：zolbetuximab；国内项目可把 IBI343 类药物作为研发参考。
应用建议：若项目是 CLDN18.2 方向，不建议只做皮下模型，应尽快升级到胃壁原位或腹膜播散模型。

3.3 FGFR2b 皮下 CDX

SNU-16 / KATO III + BALB/c nude 或 NSG
模型定位：适合 FGFR2b 抗体、双抗或 ADC 的早期筛选。
阳性药推荐：bemarituzumab 类对照。
应用建议：FGFR2b 项目需特别关注靶点表达漂移，建议在给药前后都做表达确认。

3.4 弥漫型 / 高侵袭皮下 CDX

HGC-27 / MKN45 + BALB/c nude、NOD-SCID 或 NSG
模型定位：适合高侵袭、低分化、迁移和晚期项目的基础药效筛选。
特点：HGC-27 更适合迁移侵袭、EMT 和高恶性背景；MKN45 更适合转移和播散前期评价。
阳性药推荐：5-FU 或卡培他滨联合奥沙利铂；若项目偏免疫或抗转移，应在后续升级模型中验证。

第四章 胃壁原位模型

胃壁原位模型比皮下模型更接近真实器官环境，能够更真实地反映胃壁浸润、局部血供、局部侵袭、胃周转移、肝转移和术后复发。对于需要回答“药物是否真正改变原发灶在胃部器官环境中的行为”的项目，胃壁原位模型优先级明显高于皮下模型。其局限在于手术操作要求高、批间差异更大、对 luc 标记和 IVIS / 超声 / CT 依赖较强。

4.1 人源胃壁原位模型

MKN45-luc / NUGC-4-luc / SNU-16-luc / NCI-N87-luc + NSG 或 NOD-SCID
模型定位：适合器官微环境、局部侵袭、局部递药、术后复发和自发转移研究。
造模方法：将 luc 标记细胞或肿瘤块植入胃壁，必要时联合 Matrigel 或缝扎固定，减少泄漏。
特点：MKN45-luc 和 NUGC-4-luc 更适合腹膜播散和复发方向；SNU-16-luc 更适合 FGFR2b 项目；NCI-N87-luc 更适合 HER2 靶向和局部药效。
检测指标：原位肿瘤负荷、生存、胃壁浸润深度、腹膜播散、肝转移、ctDNA、IHC（CLDN18.2、HER2、FGFR2b、Ki67）。

4.2 切除后复发模型

MKN45 / NUGC-4 / SNU-16 胃壁原位模型 + 手术切除
模型定位：适合术后复发、微小残留病灶和围手术期治疗研究。
特点：更贴近胃癌 / GEJ 腺癌术后腹膜复发和肝复发场景。
应用建议：若项目目标是围手术期治疗、局部控制或术后维持，不应停留在未切除原位模型，更应加入切除后复发设计。

第五章 转移模型

胃癌 / 胃食管结合部腺癌转移模型中，腹膜播散和肝转移最具临床相关性。腹膜播散模型更适合回答“药物是否抑制腹腔种植、腹膜结节和腹水形成”；肝转移模型更适合回答“药物是否抑制肝定植和肝微环境中的持续生长”。实验性转移模型回答的是定植问题，原位自发转移模型则更接近自然病程。

5.1 腹膜播散模型

MKN45-luc / NUGC-4-luc / SNU-16-luc + NSG 或 NOD-SCID
模型定位：适合腹腔局部治疗、腹膜播散抑制、纳米递送、腹腔灌注和抗播散策略研究。
造模方法：腹腔注射肿瘤细胞，或由胃壁原位模型进展形成播散。
特点：该模型对腹膜结节、腹水、PCI-like 评分和局部给药特别敏感，是胃癌播散项目的高优先级平台。
检测指标：腹膜结节数、腹水量、腹膜播散评分、生存、器官受累情况。
阳性药推荐：5-FU / 卡培他滨联合奥沙利铂；CLDN18.2 项目可加入 zolbetuximab 作为对照。

5.2 肝转移模型

MKN45 / MKN28 + NSG 或 NOD-SCID
模型定位：适合肝定植、肝靶向递药、抗黏附和抗微环境重塑药物研究。
造模方法：可采用脾内或门静脉注射建立实验性肝转移模型；若项目需要更高临床相关性，应优先采用胃壁原位后的自发肝转移。
特点：脾内 / 门静脉模型成功率高、周期较短，更适合比较“肝定植抑制”能力；原位自发肝转移更适合回答“原发灶—肝转移全流程”问题。
检测指标：肝转移结节数、肝重量、IVIS / 影像、生存、病理。

5.3 原位自发转移模型

MKN45-luc / NUGC-4-luc 胃壁原位模型
模型定位：适合原发灶—腹膜 / 肝转移全流程研究、围手术期治疗和长期维持治疗。
特点：更接近临床自然病程，但周期更长、变异更大。
应用建议：若项目是抗转移、抗定植或术后最小残留病灶方向，不应只做腹腔注射或门静脉模型，应加入原位自发转移设计。

第六章 同种免疫完整模型

同种免疫完整模型最大的价值在于保留完整免疫系统，因此在免疫检查点、双抗、细胞因子、放疗联合、TME 重塑和局部免疫治疗中不可替代。胃癌 / GEJ 腺癌项目若涉及 PD-1、PD-L1、CTLA-4、先天免疫激动剂或局部免疫调控，不能只依赖异种皮下模型。尤其在围手术期和原位环境下，免疫微环境差异会直接影响结果解释。

6.1 同种皮下模型

可采用小鼠胃癌同种模型在匹配品系中建立皮下平台，用于免疫检查点、先天免疫激动剂、细胞因子、联合治疗和初步 PK/PD。
模型定位：适合免疫项目早筛，而非最终决策。
检测指标：体积、生存、体重、流式免疫分型、细胞因子、IHC。
应用建议：命中后应尽快升级到同种原位或播散模型。

6.2 同种原位 / 播散模型

同种胃壁原位或腹膜播散模型更适合模拟完整免疫系统下的胃壁微环境、腹膜播散和局部免疫应答。
模型定位：适合免疫治疗、局部治疗、TME 重塑、围手术期治疗和复发研究。
特点：兼具器官微环境和完整免疫系统，是胃癌 / GEJ 腺癌免疫项目的高优先级平台。
检测指标：原位肿瘤负荷、腹膜播散、CD8 / Treg、髓系细胞谱、细胞因子、生存。

第七章 人源化免疫模型

人源化模型适合回答普通 CDX 和同种模型都无法充分回答的问题，尤其是 CLDN18.2 CAR-T、双抗、TCE、人源细胞因子以及依赖人免疫系统效应的 ADC 或抗体项目。对胃癌 / GEJ 腺癌而言，这类模型通常不用于高通量早筛，而用于关键节点验证。

7.1 huPBMC + 人源胃癌模型

模型定位：短周期双抗、CAR-T / NK 和免疫依赖型抗体验证。
推荐细胞：NCI-N87、MKN45、NUGC-4、SNU-16。
特点：建模快，适合短程药效、免疫激活和细胞因子释放读数。
局限：xGvHD 风险高，治疗窗短，更适合 2–4 周实验。
应用建议：CLDN18.2 CAR-T / satri-cel 类项目和 CLDN18.2 双抗项目可优先使用此平台做短周期验证。

7.2 huHSC + 人源胃癌模型

模型定位：长周期人免疫重建、复杂联合和微环境机制研究。
特点：人免疫系统重建更完整，适合持续性免疫治疗、耐药演化和复杂联合；但成本高、周期长、供者差异明显。
应用建议：适合候选药确认阶段，而不适合作为第一轮筛选平台。

第八章 项目升级路径建议

8.1 HER2 项目

建议路径为：
NCI-N87 皮下 CDX 早筛 → NCI-N87 胃壁原位模型验证器官相关性 → 必要时加入术后复发或转移模型。
若项目是 HER2 ADC 或双抗，应至少覆盖一个皮下平台和一个原位平台，以避免高估皮下结果对临床的外推价值。

8.2 CLDN18.2 项目

建议路径为：
MKN45 / NUGC-4 皮下模型早筛 → 胃壁原位模型验证 → 腹膜播散模型深化 → 必要时进入人源化模型。
CLDN18.2 项目不能只做皮下模型，因为腹膜播散和胃壁原位环境中的抗原可及性、局部暴露和免疫细胞接触，对结果影响很大。zolbetuximab 应作为当前高优先级临床映射参考药。

8.3 FGFR2b 项目

建议路径为：
SNU-16 / KATO III 皮下模型早筛 → 原位模型验证器官相关性 → 必要时加入肝转移或切除后复发设计。
FGFR2b 项目尤其要重视靶点表达的体内稳定性和肿瘤异质性。

8.4 围手术期与复发项目

建议路径为：
胃壁原位模型建立后行原发灶切除 → 随访腹膜 / 肝复发 → 根据项目需要加入围手术期化疗、靶向药或免疫治疗。
围手术期和复发项目不应使用单纯皮下模型替代。

8.5 免疫治疗项目

建议路径为：
同种皮下早筛 → 同种原位或播散模型验证 → 必要时进入人源化模型。
若项目涉及 PD-1 / PD-L1、CTLA-4 或新型免疫联合，应尽量引入原位或围手术期场景，因为当前临床治疗已明显向围手术期和联合策略推进。

第九章 检测指标与阳性药体系

9.1 通用检测指标

皮下模型核心终点：TGI、RTV、终末瘤重、体重。
原位模型核心终点：原位肿瘤负荷、生存、胃壁浸润深度、局部侵袭。
腹膜播散模型核心终点：腹膜结节数、PCI-like 评分、腹水量、生存。
肝转移模型核心终点：肝转移结节数、肝重量、IVIS / 影像、生存。
机制终点：CLDN18.2、HER2、FGFR2b、Ki67、药物分布、ctDNA、病理。

9.2 阳性药推荐

通用化疗：5-FU / 卡培他滨联合奥沙利铂。
HER2 阳性：trastuzumab；后线可参考 trastuzumab deruxtecan。
CLDN18.2：zolbetuximab；研发参考可加入 IBI343 类项目。
FGFR2b：bemarituzumab 类对照。
免疫方向：PD-1 / PD-L1 路径药。
围手术期治疗：可参考 FLOT 基础方案；围手术期免疫联合可参考 durvalumab + FLOT 的治疗框架。

第十章 优势与局限

皮下 CDX
优势是最标准化、最适合高通量早筛和 PK/PD；局限是对胃壁微环境、腹膜播散、局部侵袭和术后复发外推有限。

胃壁原位模型
优势是更接近真实器官环境，适合局部浸润、局部给药、复发和自发转移研究；局限是手术复杂、通量低、变异更大。

腹膜播散模型
优势是最能反映胃癌腹腔播散、腹水和局部灌注治疗价值；局限是肿瘤负荷异质性较大，评分体系必须标准化。

肝转移模型
优势是对晚期转移性胃癌最具转化意义，尤其适合肝定植抑制和肝靶向递药研究；局限是实验性模型不能完全替代自然病程。

同种免疫完整模型
优势是可评估完整免疫系统下的药效和机制，特别适合 IO 与 TME 研究；局限是鼠瘤与人瘤存在生物学差异。

人源化模型
优势是适合验证人免疫依赖机制，尤其适用于 CLDN18.2 CAR-T、双抗和 TCE；局限是成本高、供者差异大、xGvHD 风险明显。

胃癌 / 胃食管结合部腺癌动物模型的关键，不在于模型数量，而在于是否使用了最能回答当前问题的模型。对 HER2 项目，应优先保证 HER2 表达稳定性和后线 ADC 外推能力；对 CLDN18.2 项目，应尽早进入原位和腹膜播散平台；对 FGFR2b 项目，应关注靶点富集和体内表达稳定性；对围手术期、复发和免疫项目，则应坚持“原位与播散优先于单纯皮下”。整体建议采用“皮下早筛—原位验证—播散 / 转移深化—免疫确认”的递进式路径，以提高模型结果对胃癌 / 胃食管结合部腺癌临床开发的支持价值。