胃癌 / 胃食管结合部腺癌动物实验研究用户指南

导读

一、总览与使用原则
二、细胞系库与分子分层特征
三、皮下异种移植模型（CDX）
四、胃壁原位模型
五、转移模型
六、同种免疫完整模型
七、人源化免疫模型
八、项目升级路径建议
九、检测指标与阳性药体系
十、优势、局限与总体建议

一、总览与使用原则

1.1 模型选型的核心逻辑

胃癌/胃食管结合部腺癌动物模型的选择，建议围绕病理类型、分子分层、器官微环境、播散方式和免疫场景进行组合式设计，而不是仅按照皮下、原位或转移等技术路径进行区分。不同模型对应的研发问题并不相同：皮下异种移植模型更适合早期药效验证、剂量探索以及 PK/PD 研究；胃壁原位模型更适合评估器官微环境、胃壁浸润、局部侵袭、局部给药和术后复发；腹膜播散模型是研究腹腔播散、腹水形成和腹腔局部治疗的重要平台；肝转移模型更适合回答肝定植、肝靶向递药和晚期器官转移等问题。对于 ADC、双抗、CAR-T、局部给药、术后复发以及抗转移策略，研发设计宜尽早纳入原位、播散或转移模型，以提高结果的临床解释力。

1.2 临床开发变化与模型递进路线

当前胃癌/胃食管结合部腺癌的临床开发已经形成较为清晰的靶点分层路径。HER2 阳性项目通常强调 HER2 依赖性、抗 HER2 联合方案以及后线 ADC 的研究价值；CLDN18.2 项目重点关注膜表达强度、表达稳定性和腹膜播散场景；FGFR2b 项目更强调富集人群和器官相关性；免疫治疗项目则需要结合 PD-L1、MSI-H/dMMR 以及围手术期治疗场景进行设计。近年的治疗格局也已更新，zolbetuximab 已进入一线 HER2 阴性、CLDN18.2 阳性晚期胃癌/胃食管结合部腺癌治疗路径，pembrolizumab 联合 trastuzumab 及含铂、含氟嘧啶化疗方案已成为 PD-L1 CPS≥1 的 HER2 阳性晚期患者一线重要参考，durvalumab 联合 FLOT 也已进入可切除胃癌/胃食管结合部腺癌的围手术期治疗路径。基于这一变化，模型体系更适合采用“皮下早筛—原位验证—播散或转移深化—免疫确认”的递进式策略。

二、细胞系库与分子分层特征

2.1 HER2 阳性代表性细胞系

HER2 阳性项目优先考虑 NCI-N87。该细胞系是胃癌研究中最经典的 HER2 阳性模型之一，适用于 trastuzumab、抗 HER2 ADC、HER2 双抗及联合化疗研究。若研究目标面向 HER2 阳性晚期胃癌/胃食管结合部腺癌，建议重点确认 HER2 表达稳定性、膜表达一致性以及体内成瘤后的靶点保留情况。对于后线 ADC、双抗或放射性偶联药物研究，NCI-N87 常被作为优先的早期评价平台。

2.2 CLDN18.2 高表达代表性细胞系

CLDN18.2 项目优先考虑 MKN45 和 NUGC-4。MKN45 是 CLDN18.2 方向中应用非常广泛的基础模型，适合进一步扩展到腹膜播散和原位研究；NUGC-4 常用于高 CLDN18.2 表达及原位、播散相关研究。若项目涉及 CLDN18.2 抗体、ADC、双抗或 CAR-T，建议在体外与体内同时确认 CLDN18.2 的膜表达水平，并优先选择病理相关性强、表达稳定性高的模型。

2.3 FGFR2b 代表性细胞系

FGFR2b 方向建议优先使用 SNU-16 和 KATO III。这类细胞系更适合作为 FGFR2b 抗体、双抗或 ADC 的基础药效平台，也适合用于 FGFR2b 富集型胃癌项目的前期筛选。若研究目标明确指向 FGFR2b，细胞系选择应优先突出靶点表达的明确性与稳定性。

2.4 弥漫型、低分化和高侵袭代表性细胞系

针对弥漫型、低分化、高侵袭和易播散方向，建议优先考虑 HGC-27 和 MKN45。HGC-27 更适合高侵袭、迁移及晚期播散研究；MKN45 兼具 CLDN18.2 研究价值，同时适用于胃壁原位、腹膜播散和肝转移的前期平台。若项目需要判断药物对高恶性程度、深浸润或高播散风险人群的覆盖能力，建议同步配置 HGC-27 或 MKN45，而不宜仅使用 NCI-N87 或 SNU-16。

2.5 细胞系选择总原则

HER2 项目宜优先保证 HER2 表达稳定性；CLDN18.2 项目宜优先保证膜表达质量和病理相关性；FGFR2b 项目宜突出靶点富集特征；弥漫型和高侵袭项目宜优先考虑原位能力和播散能力。若项目涉及 ADC、双抗或细胞治疗，除靶点表达外，还需同时评估原位场景和腹膜播散场景中的真实暴露水平及药物可及性。

三、皮下异种移植模型（CDX）

3.1 平台定位与适用边界

皮下 CDX 是胃癌/胃食管结合部腺癌较为稳健的早期药效平台，适合开展概念验证、剂量探索、PK/PD 关联分析以及候选药物横向排序。该平台标准化程度高、重复性好、成本相对较低，适用于快速比较小分子、细胞毒药、抗体、ADC 和纳米药物。与此同时，这类模型对胃壁微环境、局部侵袭、腹膜播散、肝转移和术后复发的模拟能力有限，因此在抗转移、局部给药或免疫治疗项目中，皮下模型更适合作为早期筛选环节。

3.2 HER2 阳性皮下 CDX

NCI-N87 联合 BALB/c nude 或 NSG 小鼠，是 HER2 阳性皮下 CDX 的常用组合，适合 HER2 靶向药、ADC、双抗及联合治疗方案的早期药效筛选。通常采用常规皮下接种，在肿瘤体积达到约 80–150 mm3 后进行随机分组。常规治疗周期多为 2–4 周；如需考察耐药、撤药后再挑战或长期靶向抑制，则可延长至 4–8 周。核心评价指标包括 TGI、RTV、终末瘤重和体重，机制层面建议增加 HER2、Ki67、cleaved caspase-3 以及药物组织分布等终点。阳性对照可优先选择 trastuzumab；针对 HER2 阳性后线项目，也可将 trastuzumab deruxtecan 作为高优先级参考药物。

3.3 CLDN18.2 高表达皮下 CDX

MKN45 或 NUGC-4 联合 BALB/c nude 或 NSG 小鼠，可用于 CLDN18.2 抗体、ADC、双抗以及细胞治疗项目的早期药效与 PK/PD 研究。MKN45 更适合后续升级到胃壁原位、腹膜播散和肝转移模型；NUGC-4 更适合用于 CLDN18.2 高表达稳定性的验证。阳性药物可参考 zolbetuximab，国内项目也可将 IBI343 类药物纳入研发参考。若项目聚焦 CLDN18.2，建议在皮下筛选后尽快扩展到胃壁原位或腹膜播散模型。

3.4 FGFR2b 皮下 CDX

SNU-16 或 KATO III 联合 BALB/c nude 或 NSG 小鼠，可作为 FGFR2b 抗体、双抗或 ADC 的早期筛选平台。阳性对照可参考 bemarituzumab 类药物。由于 FGFR2b 项目容易出现靶点表达漂移，建议在给药前后均进行表达确认，以提高药效解释的可靠性。

3.5 弥漫型和高侵袭皮下 CDX

HGC-27 或 MKN45 联合 BALB/c nude、NOD-SCID 或 NSG 小鼠，适合高侵袭、低分化、迁移和晚期项目的基础药效筛选。HGC-27 更适合迁移侵袭、EMT 和高恶性背景研究；MKN45 更适合转移和播散前期评价。阳性药物可选择 5-FU 或卡培他滨联合奥沙利铂。若项目偏重免疫治疗或抗转移策略，建议在后续升级模型中进一步验证。

四、胃壁原位模型

4.1 平台特点与应用场景

胃壁原位模型较皮下模型更接近真实器官环境，能够更真实地反映胃壁浸润、局部血供、局部侵袭、胃周转移、肝转移及术后复发。对于需要判断药物是否改变原发灶在胃部器官环境中生物学行为的项目，胃壁原位模型具有更高优先级。其局限主要在于手术操作难度较高、批间差异更大，并且对荧光素酶标记及 IVIS、超声、CT 等检测手段依赖较强。

4.2 人源胃壁原位模型

MKN45-luc、NUGC-4-luc、SNU-16-luc 或 NCI-N87-luc 联合 NSG 或 NOD-SCID 小鼠，是常用的人源胃壁原位模型组合，适用于器官微环境、局部侵袭、局部给药、术后复发和自发转移研究。常见造模方式为将荧光素酶标记细胞或肿瘤块植入胃壁，必要时联合 Matrigel 或缝扎固定，以减少细胞泄漏。MKN45-luc 和 NUGC-4-luc 更适合腹膜播散及复发方向研究；SNU-16-luc 更适合 FGFR2b 项目；NCI-N87-luc 更适合 HER2 靶向和局部药效评价。检测指标可包括原位肿瘤负荷、生存、胃壁浸润深度、腹膜播散、肝转移、ctDNA 以及 CLDN18.2、HER2、FGFR2b、Ki67 等 IHC 指标。

4.3 切除后复发模型

以 MKN45、NUGC-4 或 SNU-16 构建胃壁原位模型后，再实施手术切除，可形成术后复发模型。该模型适合用于术后复发、微小残留病灶和围手术期治疗研究，更贴近胃癌/胃食管结合部腺癌术后腹膜复发和肝复发场景。若项目聚焦围手术期治疗、局部控制或术后维持治疗，建议在未切除原位模型之外，增加切除后复发设计。

五、转移模型

5.1 转移研究的临床重点

在胃癌/胃食管结合部腺癌转移研究中，腹膜播散和肝转移具有最高的临床相关性。腹膜播散模型更适合回答药物是否抑制腹腔种植、腹膜结节形成和腹水发生；肝转移模型更适合回答药物是否抑制肝定植及其在肝微环境中的持续生长。实验性转移模型主要用于研究定植阶段，原位自发转移模型则更接近自然病程。

5.2 腹膜播散模型

MKN45-luc、NUGC-4-luc 或 SNU-16-luc 联合 NSG 或 NOD-SCID 小鼠，可用于腹腔局部治疗、腹膜播散抑制、纳米递送、腹腔灌注和抗播散策略研究。造模方式通常为腹腔注射肿瘤细胞，或由胃壁原位模型自然进展形成腹膜播散。该模型对腹膜结节、腹水、类 PCI 评分和局部给药尤为敏感，是胃癌播散项目中的高优先级平台。检测终点可包括腹膜结节数、腹水量、腹膜播散评分、生存和器官受累情况。阳性药物可采用 5-FU 或卡培他滨联合奥沙利铂；CLDN18.2 项目还可加入 zolbetuximab 作为对照。

5.3 肝转移模型

MKN45 或 MKN28 联合 NSG 或 NOD-SCID 小鼠，可用于肝定植、肝靶向递药、抗黏附及抗微环境重塑药物研究。常见造模方式包括脾内注射或门静脉注射，以建立实验性肝转移模型；若项目更强调临床相关性，建议优先使用胃壁原位后的自发肝转移模型。脾内或门静脉模型成功率高、周期较短，更适合比较肝定植抑制能力；原位自发肝转移模型更适合评估从原发灶到肝转移的全流程。检测指标可包括肝转移结节数、肝重量、IVIS 或其他影像学结果、生存和病理学表现。

5.4 原位自发转移模型

以 MKN45-luc 或 NUGC-4-luc 构建胃壁原位模型后，可进一步观察腹膜或肝脏的自发转移过程。该模型适合研究原发灶至腹膜或肝脏转移的完整过程，也适用于围手术期治疗和长期维持治疗研究。其优势是更接近临床自然病程，局限在于实验周期更长、变异更大。若项目聚焦抗转移、抗定植或术后最小残留病灶，建议在腹腔注射或门静脉模型之外，同时加入原位自发转移设计。

六、同种免疫完整模型

6.1 平台价值

同种免疫完整模型能够保留完整免疫系统，因此在免疫检查点抑制剂、双抗、细胞因子、放疗联合、肿瘤微环境重塑和局部免疫治疗研究中具有不可替代的价值。胃癌/胃食管结合部腺癌项目若涉及 PD-1、PD-L1、CTLA-4、先天免疫激动剂或局部免疫调控，建议将该类模型纳入评价体系。尤其在围手术期和原位环境下，免疫微环境的差异会直接影响结果解读。

6.2 同种皮下模型

可采用小鼠胃癌同种模型在匹配品系中建立皮下平台，用于免疫检查点抑制剂、先天免疫激动剂、细胞因子、联合治疗及初步 PK/PD 研究。该平台适合免疫项目早期筛选。常用检测指标包括肿瘤体积、生存、体重、流式免疫分型、细胞因子和 IHC。若在此阶段观察到明确药效，建议尽快升级至同种原位或播散模型。

6.3 同种原位与播散模型

同种胃壁原位或腹膜播散模型更适合模拟完整免疫系统背景下的胃壁微环境、腹膜播散和局部免疫应答。该类模型适合免疫治疗、局部治疗、肿瘤微环境重塑、围手术期治疗和复发研究，同时兼具器官微环境和完整免疫系统两方面优势。检测终点可包括原位肿瘤负荷、腹膜播散、CD8/Treg、髓系细胞谱、细胞因子和生存等指标。

七、人源化免疫模型

7.1 平台定位

人源化模型适合回答普通 CDX 和同种模型难以充分解释的问题，尤其适用于 CLDN18.2 CAR-T、双抗、TCE、人源细胞因子以及依赖人免疫系统效应的 ADC 或抗体项目。对于胃癌/胃食管结合部腺癌而言，这类模型通常用于关键节点验证，而不作为高通量早筛平台。

7.2 huPBMC 联合人源胃癌模型

huPBMC 联合人源胃癌模型适合短周期双抗、CAR-T/NK 以及免疫依赖型抗体项目验证，推荐细胞包括 NCI-N87、MKN45、NUGC-4 和 SNU-16。该模型建模速度较快，适合开展短程药效、免疫激活和细胞因子释放等检测读数。其主要局限在于 xGvHD 风险较高、治疗窗口较短，通常更适合 2–4 周实验。对于 CLDN18.2 CAR-T、satri-cel 类项目以及 CLDN18.2 双抗项目，该平台可作为优先的短周期验证方案。

7.3 huHSC 联合人源胃癌模型

huHSC 联合人源胃癌模型适合长周期人免疫重建、复杂联合治疗和微环境机制研究。该平台的人免疫系统重建相对更完整，更适合持续性免疫治疗、耐药演化和复杂联合策略评估；同时也存在成本较高、周期较长、供者差异明显等特点。该模型更适用于候选药确认阶段。

八、项目升级路径建议

8.1 HER2 项目

HER2 项目建议按照“NCI-N87 皮下 CDX 早筛—NCI-N87 胃壁原位模型验证器官相关性—必要时加入术后复发或转移模型”的路径推进。若项目属于 HER2 ADC 或双抗方向，建议至少覆盖一个皮下平台和一个原位平台，以增强临床外推的可靠性。

8.2 CLDN18.2 项目

CLDN18.2 项目建议采用“MKN45 或 NUGC-4 皮下模型早筛—胃壁原位模型验证—腹膜播散模型深化—必要时进入人源化模型”的递进路径。此类项目中，腹膜播散和胃壁原位环境中的抗原可及性、局部暴露和免疫细胞接触对结果影响较大，因此宜尽早进入更高临床相关性的模型。zolbetuximab 可作为当前高优先级临床参考药物。

8.3 FGFR2b 项目

FGFR2b 项目建议采用“SNU-16 或 KATO III 皮下模型早筛—原位模型验证器官相关性—必要时加入肝转移或切除后复发设计”的路径。该类项目尤其需要关注靶点表达在体内的稳定性及肿瘤异质性。

8.4 围手术期与复发项目

围手术期与复发项目建议在胃壁原位模型建立后实施原发灶切除，并持续随访腹膜或肝脏复发情况，再根据项目需要加入围手术期化疗、靶向药或免疫治疗。此类研究对临床路径模拟要求较高，宜优先使用原位和切除后复发模型。

8.5 免疫治疗项目

免疫治疗项目建议采用“同种皮下早筛—同种原位或播散模型验证—必要时进入人源化模型”的升级路径。若项目涉及 PD-1/PD-L1、CTLA-4 或新型免疫联合方案，建议尽量引入原位或围手术期场景，以更贴近当前临床联合治疗的发展趋势。

九、检测指标与阳性药体系

9.1 通用检测指标

不同模型的核心终点应围绕研究问题进行配置。皮下模型的核心终点包括 TGI、RTV、终末瘤重和体重；原位模型重点关注原位肿瘤负荷、生存、胃壁浸润深度和局部侵袭；腹膜播散模型重点观察腹膜结节数、类 PCI 评分、腹水量和生存；肝转移模型重点记录肝转移结节数、肝重量、IVIS 或其他影像结果以及生存。机制终点可结合 CLDN18.2、HER2、FGFR2b、Ki67、药物分布、ctDNA 和病理结果综合分析。

9.2 阳性药推荐

阳性药体系可按靶点和治疗场景进行配置。通用化疗方案可采用 5-FU 或卡培他滨联合奥沙利铂；HER2 阳性项目可采用 trastuzumab，后线研究可参考 trastuzumab deruxtecan；CLDN18.2 项目可采用 zolbetuximab，并可根据研发需要加入 IBI343 类项目作为参考；FGFR2b 项目可采用 bemarituzumab 类药物作为对照；免疫方向可结合 PD-1/PD-L1 通路药物；围手术期治疗可参考 FLOT 基础方案，围手术期免疫联合可参考 durvalumab 联合 FLOT 的治疗框架。

十、优势、局限与总体建议

10.1 各类模型的优势与局限

（1）皮下 CDX

皮下 CDX 的优势在于标准化程度高，适合高通量早筛和 PK/PD 研究；局限在于对胃壁微环境、腹膜播散、局部侵袭和术后复发的模拟能力有限。

（2）胃壁原位模型

胃壁原位模型更接近真实器官环境，适合局部浸润、局部给药、复发和自发转移研究；其局限主要表现为手术复杂、通量较低、变异性更大。

（3）腹膜播散模型

腹膜播散模型能够较好反映胃癌腹腔播散、腹水形成和局部灌注治疗价值；其局限在于肿瘤负荷异质性较大，因此评分体系需要严格标准化。

（4）肝转移模型

肝转移模型对晚期转移性胃癌具有较高转化意义，尤其适合肝定植抑制和肝靶向递药研究；局限在于实验性模型仍难以完全覆盖自然病程。

（5）同种免疫完整模型

同种免疫完整模型可用于评估完整免疫系统背景下的药效与机制，特别适合免疫治疗和肿瘤微环境研究；局限在于鼠源肿瘤与人源肿瘤之间仍存在生物学差异。

（6）人源化模型

人源化模型适合验证依赖人免疫系统的作用机制，尤其适用于 CLDN18.2 CAR-T、双抗和 TCE 等项目；局限在于成本高、供者差异大且 xGvHD 风险明显。

10.2 总体建议

胃癌/胃食管结合部腺癌动物模型设计的关键，是让所选模型能够直接回答当前研发问题。对于 HER2 项目，建议重点关注 HER2 表达稳定性及后线 ADC 的外推价值；对于 CLDN18.2 项目，建议尽早进入原位和腹膜播散平台；对于 FGFR2b 项目，建议持续关注靶点富集和体内表达稳定性；对于围手术期、复发和免疫项目，建议优先采用原位与播散相关模型。整体而言，采用“皮下早筛—原位验证—播散或转移深化—免疫确认”的递进式路径，更有助于提升模型结果对胃癌/胃食管结合部腺癌临床开发的支持价值。