尤文肉瘤动物实验研究用户指南

第一章 指南总览

尤文肉瘤动物模型的选择，不应只按“皮下、原位、转移”进行技术分类，更应围绕研发问题进行分层。对尤文肉瘤项目而言，早期药效与剂量探索优先选择皮下异种移植模型；需要回答骨微环境、局部侵袭、骨破坏、骨髓腔扩展和术后复发问题时，应升级到骨原位模型；需要评价肺转移、骨外播散和复发转移抑制时，应进入相应转移模型；需要评价免疫治疗、TCE、CAR-T/NK、巨噬细胞重塑或细胞因子时，则应优先考虑同种免疫完整模型、工程化免疫模型或人源化免疫模型。

尤文肉瘤的建模逻辑，本质上是“融合基因背景 + 骨场景 + 转移场景 + 免疫场景”的组合选型。与常见上皮来源实体瘤不同，尤文肉瘤的核心并不在组织学分型，而在分子驱动、骨微环境依赖性和肺转移倾向。因此，一份真正可用的尤文肉瘤动物模型用户指南，不应只是细胞系清单，而应帮助项目团队明确“当前最关键的问题该由哪一类模型回答”。

尤文肉瘤项目通常可分为四类需求。第一类是常规细胞毒药、小分子、ADC 和纳米药的早期药效筛选，这类项目更强调成瘤稳定性、给药窗口和 PK/PD 可操作性；第二类是骨内生长、骨破坏、局部递药和放疗联合项目，这类项目更重视骨原位环境与肿瘤侵袭路径；第三类是肺转移、术后复发和微小残留病灶项目，这类项目更依赖原位切除后长期追踪；第四类是融合基因相关靶向、免疫治疗和细胞治疗项目，这类项目更依赖机制端点、免疫背景或人免疫重建。后续模型选择，应始终围绕这四类问题分流。

第二章 尤文肉瘤细胞系库与融合基因特征

2.1 EWSR1::FLI1 代表性细胞系

尤文肉瘤最常见的分子驱动是 EWSR1::FLI1 融合，因此相关细胞系仍是体内研究的主平台。常用代表性细胞系包括 A673、TC-71、RDES 和 EW8。其中，A673 是最常用的早期药效与机制研究平台之一，适合皮下药效、骨原位、肺转移衍生和融合基因相关通路研究；TC-71 是经典高可用平台，适合皮下、原位和转移研究；RDES 与 EW8 常用于补充不同生长速度、不同侵袭表型和不同药物响应背景。若项目关注 EWSR1::FLI1 依赖性、转录调控、表观遗传靶点、DNA 损伤修复或细胞周期抑制，应优先从这类细胞系中选型。

2.2 其他常用尤文肉瘤细胞系

除 A673、TC-71、RDES 和 EW8 外，SK-ES-1 也是较常见的尤文肉瘤研究平台，适合转移、生长侵袭和药物筛选研究。不同细胞系在成瘤速度、坏死比例、肺转移倾向、融合转录本表达强度及培养稳定性上存在差异，因此不建议仅用单一细胞系代表全部尤文肉瘤项目。对需要做候选药排序、提高外推稳健性的项目，建议至少采用两个至三个不同背景细胞系并行验证。

2.3 luc 标记与衍生高转移株

尤文肉瘤动物研究中，luc 标记株的价值远高于普通体积读数平台。对于骨原位、肺转移、术后复发和微小残留病灶项目，推荐优先建立 A673-luc、TC-71-luc、RDES-luc 或 EW8-luc 等可追踪平台。若项目重点是肺转移或长期复发，建议进一步建立肺转移富集衍生株或长期原位筛选株，以提高转移模型的稳定性与检出率。

2.4 细胞系选型总原则

尤文肉瘤项目的细胞系选择，应优先围绕融合基因状态、骨原位适配性、转移潜能、目标抗原表达稳定性以及项目所需终点进行。若项目偏向早期药效和剂量探索，应优先选择成瘤稳定、批间一致性较好的 A673、TC-71、RDES 或 EW8；若项目偏向骨破坏、局部侵袭和转移，应优先考虑 luc 标记并具备原位或肺转移经验的模型；若项目涉及融合蛋白下游通路、表观遗传调控或转录复合体抑制，则应优先确认融合状态、STR 身份和关键通路依赖性，而不是只按“常用”程度选株。

第三章 皮下异种移植模型（CDX）

皮下 CDX 是尤文肉瘤最稳健的早期药效平台，适用于药效 PoC、剂量探索、PK/PD 关联以及不同候选药之间的横向排序。其优势是成瘤率高、操作标准化、成本相对较低、批间一致性好；局限是不能真实反映骨微环境、骨髓腔压力、局部骨破坏、肺转移链路及术后复发，因此不宜单独用于判断抗转移、抗骨破坏或免疫治疗成败。

3.1 A673 皮下 CDX

A673 + BALB/c nude、NOD-SCID、NSG 或 NOG

模型定位： 适合小分子、细胞毒药、ADC、纳米药及融合基因相关靶向策略的早期药效筛选。
造模方法： 皮下接种人源细胞 1×10^6–5×10^6，或接种 20–40 mm3 肿瘤块；肿瘤达到约 80–150 mm3 后随机分组。
治疗周期： 通常 2–4 周；若研究耐药、撤药再挑战或长期暴露，可延长至 4–8 周。
检测指标： TGI、RTV、终末瘤重、体重；机制端点可加入 CD99、Ki67、cleaved caspase-3、融合转录本表达、PARP、DNA 损伤标志物及 PK/PD。
阳性药推荐： VDC/IE 等效化疗参照、伊立替康/替莫唑胺、拓扑异构酶抑制方向药物、多靶点 TKI。
应用建议： 是尤文肉瘤早筛的主平台之一，适合标准化药效、剂量探索和 payload 排序，但若项目目标涉及骨微环境、肺转移或术后复发，应尽快升级到骨原位或转移模型。

3.2 TC-71 皮下 CDX

TC-71 + BALB/c nude、NOD-SCID、NSG 或 NOG

模型定位： 适合常规细胞毒药、靶向药、ADC 和联合治疗的早期药效评价。
造模方法： 常规皮下接种，肿瘤达到约 80–150 mm3 后入组。
治疗周期： 2–4 周。
检测指标： TGI、RTV、终末瘤重、CD99、Ki67、凋亡指标、融合基因表达。
阳性药推荐： VDC/IE 等效化疗、伊立替康/替莫唑胺、多靶点 TKI。
应用建议： TC-71 在从皮下到原位、再到转移的连续升级中衔接性较好，适合构建系列化药效路径。

3.3 RDES / EW8 / SK-ES-1 皮下 CDX

RDES、EW8、SK-ES-1 + BALB/c nude、NOD-SCID 或 NSG

模型定位： 适合补充不同生长速度、不同侵袭背景和不同药物敏感性的验证平台。
造模方法： 常规皮下接种，当肿瘤达到约 80–150 mm3 入组。
治疗周期： 通常 2–4 周。
检测指标： TGI、RTV、终末瘤重、CD99、Ki67、凋亡和细胞周期相关指标。
阳性药推荐： 细胞毒药、伊立替康/替莫唑胺、多靶点 TKI。
应用建议： 适合在候选药确认阶段提高结果稳健性，不建议只依赖单株完成所有决策。

3.4 皮下模型总原则

皮下模型适合剂量探索、靶向药/ADC/小分子早筛；若目标涉及转移、局部递药、骨微环境、肺转移、术后复发或 BBB 相关暴露，则应尽快升级到原位或转移模型。对于尤文肉瘤而言，皮下缩瘤并不天然等价于骨内控瘤或抗肺转移能力，因此不宜单独作为进入临床前确认阶段的唯一依据。

第四章 骨原位模型

骨原位模型是尤文肉瘤动物实验中最接近真实疾病场景的基础平台。与皮下模型相比，胫骨内、股骨内或邻骨原位模型能更真实地呈现骨髓腔环境、骨皮质破坏、骨膜反应、局部疼痛和向肺转移的前端过程，因此在抗骨破坏、局部侵袭、局部递药、放疗联合和术后复发研究中优先级更高。其局限是操作门槛高、通量低、需要影像学配合，且批间差异更大。

4.1 A673 骨原位模型

A673-luc 或 A673 + NOD-SCID、NSG 或 NOG

模型定位： 适合研究骨内生长、骨破坏、局部侵袭、原位切除后复发和肺转移前端过程。
造模方法： 常采用胫骨内或股骨内注射，建议使用 luc 标记株并结合 X-ray、micro-CT 或 BLI 连续追踪。
治疗周期： 通常 3–6 周；若研究术后复发或长期抗转移，可延长至 6–10 周。
检测指标： 原位肿瘤负荷、BLI、骨破坏评分、micro-CT、病理、肺转移、生存。
应用建议： 若项目核心是骨微环境、局部侵袭和肺转移，A673 骨原位模型优先级显著高于皮下模型。

4.2 TC-71 骨原位模型

TC-71-luc 或 TC-71 + NOD-SCID、NSG 或 NOG

模型定位： 适合骨原位控瘤、骨破坏、放疗联合和转移研究。
特点： 与 A673 相比，TC-71 常被用于从标准药效延伸到原位和转移验证，适合建立较连续的研发路径。
应用建议： 对需要从皮下早筛直接升级到骨场景验证的项目，TC-71 是实用性较高的平台。

4.3 RDES / EW8 骨原位模型

RDES-luc、EW8-luc + NOD-SCID 或 NSG

模型定位： 适合补充不同侵袭性和不同治疗反应的骨原位验证。
特点： 适合在候选药确认阶段增加模型多样性，观察不同背景下的骨破坏、局部侵袭和肺转移表现。
应用建议： 当项目对稳健性要求高，或前期结果存在细胞系依赖性差异时，建议纳入此类模型。

4.4 原位模型总原则

原位模型应优先用于回答皮下模型无法充分回答的问题，包括骨内暴露、骨髓腔渗透、骨破坏、放疗增敏、原发灶切除后复发和肺转移抑制。若项目核心在于“药物是否能在真实骨环境中保持活性”，则骨原位模型优先级应显著高于皮下模型。

第五章 转移模型

尤文肉瘤转移模型重点用于回答三个问题：第一，药物是否抑制肺转移定植；第二，药物是否在远处器官微环境中保持活性；第三，原发灶控制后是否仍能降低复发与转移风险。对尤文肉瘤而言，肺转移是优先级最高的平台，其次是骨外播散、局部复发和微小残留病灶场景。

5.1 肺转移模型

常用细胞：A673-luc、TC-71-luc、SK-ES-1-luc

模型定位： 抗转移、抗定植、术后复发和循环后定植过程研究。
造模方法： 实验性肺转移多采用尾静脉注射；若需更接近临床链路，推荐采用骨原位建模后观察自发肺转移，或在原发灶达到一定负荷后手术切除并追踪肺转移。
特点： 尾静脉模型重复性高、周期短，但主要反映循环后定植阶段；骨原位自发肺转移模型更贴近临床全过程。
治疗周期： 实验性肺转移通常 2–6 周，自发肺转移通常总周期 4–10 周。
检测指标： BLI、肺结节数、肺重、组织病理、生存。
应用建议： 对尤文肉瘤而言，肺转移首选骨原位自发转移路径，而不是仅用尾静脉模型替代全部转移外推。

5.2 术后复发与微小残留病灶模型

常用细胞：A673-luc、TC-71-luc

模型定位： 围手术期治疗、抗复发、微小残留病灶清除和肺转移抑制研究。
造模方法： 采用骨原位建模，待原发灶达到一定负荷后进行截肢或局部切除，随后观察局部复发、肺转移和生存。
特点： 更贴近临床“局部控制后远处复发”的关键问题，是尤文肉瘤转化研究中价值较高的平台。
检测指标： 复发时间、肺转移负荷、BLI、生存、病理。
应用建议： 若项目定位于复发难治或围手术期干预，应优先考虑该模型，而不是只用皮下或单纯尾静脉模型。

5.3 其他播散模型

常用细胞：TC-71、SK-ES-1、RDES 衍生株

模型定位： 研究骨外播散、晚期多器官负荷和系统性治疗反应。
造模方法： 可采用左心室注射、静脉注射或特殊器官接种。
特点： 适合研究多器官定植与系统暴露，但其临床链路外推性通常低于骨原位自发转移模型。
应用建议： 更适合回答特定器官定植问题，而不宜替代标准骨原位路径。

第六章 人源化免疫尤文肉瘤模型

人源化模型适合回答普通 CDX、PDX 和工程化同种模型都无法充分回答的问题，特别是 TCE、CAR-T/NK、人源细胞因子、检查点联合及强依赖人免疫效应的 ADC/双抗项目。该类模型的重点不是通量，而是关键节点验证。

8.1 huPBMC + 人源尤文肉瘤细胞模型

模型定位： 短周期免疫治疗筛选。
适用细胞： A673、TC-71、RDES、EW8、SK-ES-1。
特点： 建模快，通常 2–4 周可进入实验；适合短期 IO、TCE、CAR-T/NK 研究。
局限： xGvHD 风险高，治疗窗短，更适合短程读数而非长期机制研究。
检测指标： 肿瘤负荷、人免疫细胞重建率、hCD45、hCD3、hCD8、hNK、细胞因子、CRS/xGvHD 风险指标。

8.2 huHSC + 人源尤文肉瘤模型

模型定位： 长周期人免疫重建、复杂免疫机制研究和联合策略验证。
特点： 免疫重建更稳定，适合较长周期免疫治疗、耐药和复发研究；但准备时间长、成本高、供者差异明显。
应用建议： 适用于进入候选药确认阶段，或需要解释复杂人免疫机制时使用。

第九章 放疗联合、术后复发与特殊场景模型

尤文肉瘤项目若涉及放疗增敏、围手术期干预、术后复发、微小残留病灶或骨痛控制，单纯皮下模型通常不足。更推荐采用骨原位或术后复发模型，待原发灶达到一定负荷后进行放疗、切除或药物干预，随后观察局部复发、肺转移和生存。

这类模型尤其适合评价放疗增敏剂、围手术期免疫治疗、局部制剂、抗复发药和微小残留病灶清除策略。若项目关注“初始缩瘤有效但复发抑制不足”的情形，该类模型的价值显著高于单纯早期皮下模型。

第十章 项目升级路径建议

10.1 小分子、细胞毒药与 ADC 项目

建议路径为：

皮下 CDX 早筛 → 骨原位模型验证骨微环境与药物分布 → 必要时加入肺转移或术后复发模型

若项目聚焦 payload、DNA 损伤类药物、转录调控抑制剂或多靶点 TKI，应优先确认体内机制端点，而不应只看体积变化。

10.2 融合基因相关靶向项目

建议路径为：

皮下 CDX 做早期排序 → 骨原位模型验证真实骨环境活性 → PDX 或多细胞系平台确认稳健性

若项目为 EWSR1::FLI1 相关通路抑制或表观遗传调控药物，建议至少设置一个皮下模型和一个骨原位模型，以避免高估皮下缩瘤结果对骨场景的外推。

10.3 转移与复发抑制项目

建议路径为：

骨原位模型建立原发灶 → 观察或切除后追踪肺转移 → 必要时增加实验性肺转移模型拆分定植阶段

若项目是抗转移策略，优先使用 luc 标记株，并尽量把 BLI、生存和器官病理纳入核心终点。

10.4 免疫治疗项目

建议路径为：

工程化同种或短周期人免疫效应模型早筛 → 人源化模型验证 → 必要时加入原位或术后复发场景

该类项目不建议只在普通免疫缺陷皮下 CDX 中判断成败，因为其无法真实反映免疫浸润、细胞毒性和微环境重塑。

第十一章 检测指标与阳性药体系

11.1 通用检测指标

皮下模型核心终点：TGI、RTV、终末瘤重、体重。
骨原位模型核心终点：原位肿瘤负荷、骨破坏评分、micro-CT、BLI、生存。
肺转移模型核心终点：BLI、肺结节数、肺病理、生存。
术后复发模型核心终点：复发时间、肺转移负荷、生存。
免疫模型机制终点：CD8、髓系细胞谱、细胞因子、hCD45 重建率。
机制终点可加入：CD99、Ki67、cleaved caspase-3、融合基因表达、ctDNA、转录组及药代药效关联。

11.2 阳性药推荐

一线化疗参考：VDC/IE 等效化疗框架。
复发难治方向参考：伊立替康/替莫唑胺、拓扑异构酶抑制方向药物。
多靶点 TKI 参考：regorafenib、pazopanib。
前沿研发参考：lurbinectedin、seclidemstat、TK216 等可作为机制性或临床探索性参照。

阳性药的选择应与项目阶段相匹配。早期药效平台更强调稳健对照和信号强度，建议优先使用临床路径清晰、机制明确的标准治疗药物；对于融合蛋白相关靶向、表观遗传药物和复发难治方向，可在标准治疗基础上增加前沿机制药作为参考，而不应只用单一细胞毒药构建对照体系。

第十二章 优势与局限

皮下 CDX
优势是标准化程度最高、重复性最好、适合早筛和 PK/PD；局限是缺乏骨微环境、真实骨破坏路径和肺转移链路。

骨原位模型
优势是更接近临床骨内环境，适合骨破坏、局部侵袭、术后复发和自发肺转移；局限是操作复杂、通量低、批间差异较大。

实验性转移模型
优势是周期短、读出聚焦，适合回答器官定植问题；局限是不能完整反映自然转移全过程。

PDX 模型
优势是保留患者来源肿瘤异质性，转化意义更强；局限是成本高、周期长、通量低。

人源化与免疫相关模型
优势是可评价人免疫依赖机制；局限是成本高、噪声大、供者差异和 xGvHD 风险显著。

尤文肉瘤动物模型的关键，不是“做了多少模型”，而是“当前研发问题是否由合适的模型回答”。对早期药效项目，应优先保证皮下平台的稳定性与 PK/PD 可解释性；对骨破坏、局部侵袭和肺转移项目，应尽快进入骨原位场景；对复发难治和免疫项目，应把术后复发、人源化或工程化免疫平台放到更高优先级。建议整体采用“皮下早筛—骨原位验证—转移深化—复发补强—免疫确认”的递进式路径，以提高模型结果对临床开发的支持价值。