导读

一、服务概述与适用范围

二、核心服务内容

三、典型项目应用场景

四、项目合作流程与交付内容

五、平台优势

附录A 细胞层面药效筛选的设计原则

附录B 不同疾病方向的细胞模型

附录C 常见核心检测指标的设计思路

附录D 细胞实验常用药物溶媒体系及溶媒使用要求

一、服务概述与适用范围

1.1 服务对象与服务范围

南京博恩生物技术有限公司面向高校、科研院所、医药企业与生物技术企业，提供覆盖疾病相关细胞造模、二维药效筛选、共培养体系、屏障模型、检测指标设计与结果分析的系统化服务。公司围绕客户的具体疾病方向，从模型选择、造模策略、检测指标匹配到结果交付进行整体设计，帮助客户建立围绕疾病机制开展的细胞层面药效筛选体系。

1.2 方案定位

许多药效筛选项目后续转化效果不理想，常见原因在于疾病模型与药物作用机制匹配不足，或检测指标设置较为单一。细胞层面药效筛选的关键在于先明确三个问题：疾病更适合采用哪类细胞模型进行模拟，药物作用更可能体现在哪些检测指标上，以及是否需要引入炎症、免疫、基质或屏障等因素。将疾病机制、细胞模型与检测指标放在同一逻辑框架中进行设计，有助于提升筛选结果的解释力与后续转化价值。

1.3 适用疾病方向与项目需求

本方案适用于肿瘤、肺纤维化、哮喘、慢性阻塞性肺病、血管炎症与动脉粥样硬化、心肌纤维化、代谢相关脂肪性肝病、肝纤维化、急性肾损伤、慢性肾病、神经退行性疾病、神经炎症与血脑屏障损伤、糖尿病、肥胖与脂代谢异常、炎症性肠病、肠屏障损伤、感染相关疾病、免疫炎症疾病、关节退行性与炎症性疾病、皮肤相关疾病、眼表炎症与角膜修复以及妇科炎症与子宫内膜异位症等多个方向，可服务于药效初筛、机制验证、模型比较、候选分子评价，以及与后续动物实验、病理验证和分子机制研究衔接的项目需求。

二、核心服务内容

2.1 疾病相关细胞造模服务

可提供常规细胞株、原代细胞、诱导损伤模型、炎症刺激模型、缺氧模型、纤维化模型、脂代谢异常模型、免疫极化模型，以及上皮或内皮屏障模型等多类疾病相关细胞造模服务。

2.2 细胞层面药效筛选服务

可围绕细胞活力与细胞毒性、增殖、凋亡、程序性细胞死亡、迁移、侵袭、屏障功能、分泌功能、免疫极化、脂滴积累、代谢重编程、线粒体功能、活性氧、细胞外基质沉积、纤维化表型、色素生成、神经损伤修复、创面修复等多个维度开展药效评价。

2.3 共培养与复杂互作模型服务

在肿瘤、炎症、纤维化、肠病、呼吸系统疾病、血管疾病、关节疾病、妇科疾病和皮肤疾病等方向，可提供肿瘤细胞与成纤维细胞共培养、肿瘤细胞与免疫细胞共培养、上皮细胞与成纤维细胞共培养、上皮屏障与免疫细胞共培养、内皮细胞与免疫细胞共培养等模型，以提升结果的疾病相关性。

2.4 配套检测与结果分析服务

可提供显微成像、流式细胞术、酶标检测、化学发光检测、酶联免疫吸附测定、多指标联合分析、图像定量、统计分析，以及与动物实验、组织病理和分子实验衔接的结果整理与后续设计建议。

三、典型项目应用场景

3.1 靶点验证阶段

围绕疾病机制选择关键细胞模型，并建立与靶点作用方式相对应的检测指标体系，用于验证干预后是否出现预期表型变化。

3.2 候选化合物初筛阶段

采用重复性较高、通量较好的二维单细胞模型，完成细胞活力、毒性、增殖或基础炎症指标的快速筛选。

3.3 疾病相关复核阶段

在初筛基础上，引入共培养、条件刺激或屏障模型，验证候选分子在更贴近疾病环境条件下的表现是否稳定。

3.4 机制研究阶段

对于肿瘤耐药、纤维化、慢性炎症、皮肤屏障异常、关节炎性破坏、眼表修复和妇科慢性炎症等问题，可进一步通过多细胞互作模型研究药效来源及作用路径。

3.5 后续研究衔接阶段

在进入动物实验前，通过体外模型对候选方案进行机制补充、药效确认和关键指标预筛，有助于提高后续研究效率与设计质量。

四、项目合作流程与交付内容

4.1 合作流程

客户提供研究背景、研究目的、疾病方向、候选药物、预期筛选层级及参考资料后，南京博恩将进行方案评估，并就模型选择、造模策略、检测指标设置、分层筛选路径和后续研究衔接提出建议。整体流程通常包括方案沟通、项目评估、正式报价、合同签订、项目执行、阶段反馈、结果提交和结题交付。

4.2 重点评估内容

重点评估内容包括当前疾病更适合采用哪一类细胞模型，项目应先从二维单模型起步还是直接引入共培养或屏障模型，药效应通过哪些检测指标体现，是否需要采用初筛、复核与机制验证相结合的设计，以及是否需要与动物实验、组织病理或分子机制研究进一步衔接。

4.3 可交付内容

可交付内容包括实验方案、原始数据文件、统计分析结果、图表整理、图注说明、阶段性结果总结、终版研究报告，以及根据需求整理的发表用图片与结果素材。对于需要继续推进的项目，也可结合结果提供后续研究建议。

五、平台优势

5.1 围绕疾病机制开展整体设计

南京博恩提供的服务已超出单一实验项目执行范畴，更强调围绕疾病机制、细胞模型、造模方式、检测指标和结果解释构建整体细胞层面药效筛选方案。公司先聚焦疾病关键问题，再设计模型与指标，从而提高筛选结果的疾病相关性、稳定性与可解释性。

5.2 提供一体化研究支持

无论是肿瘤、炎症、纤维化、代谢性疾病、肾病、神经退行性疾病，还是肠屏障疾病、呼吸系统疾病、关节疾病、眼表炎症、妇科慢性炎症和皮肤相关疾病，南京博恩均可围绕客户项目目标，提供从模型评估、方案设计到实验执行和结果交付的一体化研究支持，帮助客户建立更清晰、更可靠、更贴近疾病本身的体外药效筛选路线。

附录A 细胞层面药效筛选的设计原则

A1、先选对疾病模型，再开展药效评价

不同疾病的关键驱动细胞并不相同。肿瘤项目可从肿瘤细胞出发；若关注耐药、侵袭或免疫逃逸，还需考虑成纤维细胞和免疫细胞。肺纤维化项目通常需要同时考虑肺泡上皮细胞、成纤维细胞和巨噬细胞。皮肤炎症项目则常需同时考虑角质形成细胞、真皮成纤维细胞和免疫细胞。只有模型与疾病关键问题相匹配，后续检测结果才能真正支撑药效判断。

A2、模型设计与检测指标需要同步规划

药物作用未必仅表现为细胞活力变化。对于不同疾病，更具判断价值的检测指标可包括增殖、凋亡、迁移、炎症因子释放、屏障功能、胶原沉积、脂滴积累、氧化应激、线粒体功能、免疫极化、转运功能、屏障通透性、神经突起变化、黏液分泌、色素生成或创面闭合速度等。模型与检测指标同步设计，有助于保证结果具有清晰的解释框架。

A3、二维单细胞模型与二维共培养模型可作为分层工具使用

二维单细胞模型适合高通量、低成本、重复性较好的早期初筛；二维共培养或条件刺激模型更适合引入微环境因素，用于提高疾病相关性。两类模型分别适用于不同研究阶段和不同问题深度，可根据项目目标分层使用。

附录B 不同疾病方向的细胞模型

B1、肿瘤方向

B1.1、细胞模型

常用细胞模型包括肿瘤细胞株、患者来源肿瘤细胞、癌相关成纤维细胞、肿瘤相关巨噬细胞样模型、外周血单个核细胞、T细胞，以及肿瘤细胞与成纤维细胞或免疫细胞的共培养体系。

B1.2、造模方式

常见造模方式包括二维单培养、药物耐受诱导、缺氧刺激、炎症因子刺激、TGF-β刺激，以及肿瘤细胞与成纤维细胞、免疫细胞的跨膜共培养或直接共培养。

B1.3、检测指标

常用检测指标包括细胞活力、凋亡、克隆形成、迁移、侵袭、耐药变化、炎症因子释放、免疫杀伤相关指标，以及细胞通讯相关蛋白和信号通路变化。

B2、肺纤维化方向

B2.1、细胞模型

常用细胞模型包括肺泡上皮细胞、肺成纤维细胞、肺巨噬细胞，以及上皮细胞与成纤维细胞、成纤维细胞与巨噬细胞的共培养体系。

B2.2、造模方式

常见造模方式包括TGF-β刺激、上皮损伤诱导、炎症因子刺激、条件培养基刺激，以及上皮细胞与成纤维细胞共培养模型。

B2.3、检测指标

重点检测指标包括α-SMA、Collagen I、FN1、细胞迁移、上皮损伤标志物、炎症因子释放、ROS水平和细胞通讯相关变化。

B3、哮喘方向

B3.1、细胞模型

常用细胞模型包括支气管上皮细胞、气道平滑肌细胞、成纤维细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和巨噬细胞，以及上皮细胞与免疫细胞或平滑肌细胞的共培养体系。

B3.2、造模方式

常见造模方式包括IL-4、IL-13、IL-33等炎症因子刺激，过敏原相关刺激，以及上皮细胞与免疫细胞共培养。

B3.3、检测指标

重点检测指标包括黏液分泌、炎症因子、上皮屏障功能、细胞迁移、平滑肌细胞增殖、细胞外基质相关蛋白和气道重塑相关变化。

B4、慢性阻塞性肺病方向

B4.1、细胞模型

常用细胞模型包括气道上皮细胞、支气管上皮细胞、肺成纤维细胞、巨噬细胞和中性粒细胞。

B4.2、造模方式

常见造模方式包括烟雾提取物刺激、氧化应激诱导、炎症因子刺激、感染相关刺激，以及上皮细胞与成纤维细胞或免疫细胞共培养。

B4.3、检测指标

重点检测指标包括细胞活力、氧化应激、炎症因子、屏障功能、黏液分泌、纤毛相关蛋白、基质降解相关酶和修复能力变化。

B5、血管炎症与动脉粥样硬化方向

B5.1、细胞模型

常用细胞模型包括内皮细胞、血管平滑肌细胞、单核细胞、巨噬细胞，以及内皮细胞与平滑肌细胞、内皮细胞与免疫细胞的共培养体系。

B5.2、造模方式

常见造模方式包括氧化低密度脂蛋白刺激、炎症刺激、泡沫细胞诱导、平滑肌细胞表型转换诱导和内皮屏障损伤模型。

B5.3、检测指标

重点检测指标包括内皮通透性、跨内皮电阻、ICAM-1、VCAM-1表达、泡沫化、细胞迁移、小管形成、炎症因子表达，以及平滑肌细胞收缩型与合成型转换相关指标。

B6、心肌纤维化方向

B6.1、细胞模型

常用细胞模型包括心脏成纤维细胞、心肌细胞、内皮细胞及其共培养体系。

B6.2、造模方式

常见造模方式包括TGF-β刺激、血管紧张素刺激、机械应激模拟和炎症环境刺激。

B6.3、检测指标

重点检测指标包括Collagen I、α-SMA、FN1、炎症因子、收缩相关蛋白、细胞活力、细胞迁移和细胞互作信号变化。

B7、代谢相关脂肪性肝病方向

B7.1、细胞模型

常用细胞模型包括肝细胞、肝星状细胞、库普弗细胞，以及肝细胞与肝星状细胞、肝细胞与免疫细胞的共培养体系。

B7.2、造模方式

常见造模方式包括游离脂肪酸负荷、脂毒性刺激、炎症刺激、内质网应激诱导，以及多细胞共培养模拟脂变与炎症环境。

B7.3、检测指标

重点检测指标包括脂滴积累、炎症因子释放、胰岛素抵抗相关变化、线粒体功能、氧化应激、肝毒性指标、纤维化标志物和代谢重编程相关变化。

B8、肝纤维化方向

B8.1、细胞模型

常用细胞模型包括肝星状细胞、肝细胞、库普弗细胞，以及肝细胞与肝星状细胞共培养体系。

B8.2、造模方式

可通过肝星状细胞活化、炎症因子刺激、脂毒性刺激和条件培养基刺激构建模型。

B8.3、检测指标

重点检测指标包括α-SMA、Collagen I、FN1、炎症因子、细胞外基质沉积、肝细胞损伤指标和细胞迁移变化。

B9、急性肾损伤方向

B9.1、细胞模型

常用细胞模型包括近端肾小管上皮细胞、肾小球内皮细胞和足细胞。

B9.2、造模方式

常见造模方式包括顺铂、庆大霉素、造影剂、高氧化应激和缺氧再氧化刺激。

B9.3、检测指标

重点检测指标包括细胞活力、KIM-1、NGAL、氧化应激、线粒体功能、炎症因子、屏障完整性和细胞死亡方式。

B10、慢性肾病方向

B10.1、细胞模型

常用细胞模型包括近端肾小管上皮细胞、足细胞、肾小球内皮细胞、肾间质成纤维细胞，以及肾小管上皮细胞与成纤维细胞或内皮细胞的共培养体系。

B10.2、造模方式

常见造模方式包括蛋白负荷刺激、高糖刺激、炎症刺激、氧化应激诱导以及纤维化刺激。

B10.3、检测指标

重点检测指标包括转运功能、屏障完整性、炎症因子、氧化应激、衰老相关标志物、α-SMA、Collagen I和肾毒性相关指标。

B11、神经退行性疾病方向

B11.1、细胞模型

常用细胞模型包括神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞以及神经元与胶质细胞共培养体系。

B11.2、造模方式

常见造模方式包括Aβ刺激、α-synuclein刺激、Tau相关刺激、谷氨酸兴奋毒性诱导和氧化应激诱导。

B11.3、检测指标

重点检测指标包括神经元存活、Synapsin、PSD-95、神经突起变化、线粒体功能、ROS、炎症因子和细胞死亡方式。

B12、神经炎症与血脑屏障损伤方向

B12.1、细胞模型

常用细胞模型包括脑微血管内皮细胞、周细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞，以及血脑屏障相关共培养体系。

B12.2、造模方式

常见造模方式包括LPS刺激、炎症因子刺激、缺氧再氧化和氧化应激诱导。

B12.3、检测指标

重点检测指标包括屏障通透性、ZO-1、Occludin、Claudin-5表达、炎症因子、黏附分子、ROS和免疫细胞黏附相关变化。

B13、糖尿病与胰岛功能方向

B13.1、细胞模型

常用细胞模型包括胰岛β细胞、胰岛细胞系、原代胰岛细胞，以及胰岛细胞与炎症细胞因子刺激模型。

B13.2、造模方式

常见造模方式包括高糖刺激、脂毒性刺激、炎症应激和氧化应激诱导。

B13.3、检测指标

重点检测指标包括胰岛素分泌、细胞活力、氧化应激、内质网应激、细胞凋亡、线粒体功能和功能稳定性相关指标。

B14、肥胖与脂肪代谢异常方向

B14.1、细胞模型

常用细胞模型包括前脂肪细胞、成熟脂肪细胞、巨噬细胞，以及脂肪细胞与免疫细胞共培养体系。

B14.2、造模方式

常见造模方式包括分化诱导、脂肪酸处理、炎症刺激和胰岛素抵抗诱导。

B14.3、检测指标

重点检测指标包括脂滴积累、葡萄糖摄取、脂解、炎症因子、线粒体代谢、胰岛素信号变化和细胞活力。

B15、炎症性肠病方向

B15.1、细胞模型

常用细胞模型包括肠上皮细胞、杯状细胞、巨噬细胞、淋巴细胞，以及上皮细胞与免疫细胞的跨膜共培养屏障体系。

B15.2、造模方式

常见造模方式包括TNF-α等炎症因子刺激、LPS等微生物相关分子刺激、上皮屏障损伤诱导以及上皮细胞与免疫细胞共培养。

B15.3、检测指标

重点检测指标包括跨上皮电阻、荧光示踪通透性、ZO-1、Occludin、Claudin表达、炎症因子释放、上皮损伤与修复能力、黏液相关蛋白变化和细胞死亡指标。

B16、肠屏障损伤与黏膜修复方向

B16.1、细胞模型

常用细胞模型包括肠上皮细胞、杯状细胞、内皮细胞和巨噬细胞。

B16.2、造模方式

常见造模方式包括化学刺激、氧化应激、炎症因子刺激和划痕损伤模型。

B16.3、检测指标

重点检测指标包括屏障通透性、ZO-1、Occludin、Claudin、黏液分泌、细胞迁移、创面修复、炎症因子和细胞活力。

B17、感染相关药效方向

B17.1、细胞模型

常用细胞模型包括宿主上皮细胞、内皮细胞、巨噬细胞、单核细胞以及屏障相关模型。

B17.2、造模方式

常见造模方式包括病原相关分子刺激、感染模拟、炎症因子刺激和宿主细胞与免疫细胞共培养。

B17.3、检测指标

重点检测指标包括细胞损伤、炎症水平、屏障功能、宿主应答、细胞死亡方式、氧化应激和炎症放大相关变化。

B18、免疫炎症疾病方向

B18.1、细胞模型

常用细胞模型包括巨噬细胞、单核细胞、T细胞、树突状细胞，以及其与组织细胞的共培养体系。

B18.2、造模方式

常见造模方式包括巨噬细胞极化诱导、细胞因子刺激、抗原激活和免疫细胞与靶组织细胞共培养。

B18.3、检测指标

重点检测指标包括免疫极化状态、细胞因子谱、迁移、吞噬功能、杀伤功能、细胞毒性和信号通路变化。

B19、关节退行性与炎症性疾病方向

B19.1、细胞模型

常用细胞模型包括软骨细胞、滑膜成纤维样细胞、滑膜巨噬细胞、成骨细胞以及相关共培养体系。骨关节炎项目通常以软骨细胞和巨噬细胞互作为重点；类风湿性关节炎项目通常以滑膜成纤维样细胞与巨噬细胞、T细胞互作为重点。

B19.2、造模方式

常见造模方式包括IL-1β、TNF-α等炎症因子刺激，LPS刺激，巨噬细胞极化诱导，以及滑膜成纤维样细胞与巨噬细胞条件培养基刺激或直接共培养。

B19.3、检测指标

重点检测指标包括MMPs、聚集蛋白聚糖降解相关变化、炎症因子释放、滑膜细胞迁移与侵袭、软骨基质相关蛋白表达、细胞凋亡和氧化应激变化。

B20、皮肤相关疾病方向

B20.1、细胞模型

常用细胞模型包括角质形成细胞、真皮成纤维细胞、黑素细胞、内皮细胞、肥大细胞、巨噬细胞、T细胞，以及角质形成细胞与成纤维细胞、角质形成细胞与免疫细胞、黑素细胞与角质形成细胞的共培养体系。

B20.2、造模方式

常见造模方式包括IL-4、IL-13、IL-17A、IL-22、TNF-α等炎症因子刺激，屏障损伤诱导，TGF-β刺激，氧化应激诱导，划痕修复模型，以及角质形成细胞与成纤维细胞、免疫细胞或黑素细胞的共培养。

B20.3、检测指标

重点检测指标包括角质形成细胞增殖、Filaggrin、Loricrin、ZO-1等屏障蛋白表达、炎症因子与趋化因子释放、胶原沉积、α-SMA、细胞迁移、创面闭合速度、黑色素含量、Tyrosinase活性、氧化应激及细胞间通讯变化。该方向可覆盖银屑病、特应性皮炎、慢性创面、皮肤纤维化、色素异常等项目需求。

B21、眼表炎症与角膜修复方向

B21.1、细胞模型

常用细胞模型包括角膜上皮细胞、结膜上皮细胞、角膜成纤维细胞、结膜杯状细胞，以及上皮细胞与免疫细胞的共培养体系。

B21.2、造模方式

常见造模方式包括高渗刺激、炎症因子刺激、氧化应激诱导、机械损伤模型和屏障损伤模型。

B21.3、检测指标

重点检测指标包括细胞活力、炎症因子、MUC相关蛋白、ZO-1等紧密连接蛋白、迁移修复能力和屏障完整性，适用于干眼、角膜炎症和眼表修复类项目。

B22、妇科炎症与子宫内膜异位症方向

B22.1、细胞模型

常用细胞模型包括子宫内膜上皮细胞、子宫内膜基质细胞、腹膜间皮细胞、巨噬细胞和血管内皮细胞，以及相关共培养体系。

B22.2、造模方式

常见造模方式包括雌激素相关刺激、炎症因子刺激、缺氧诱导、氧化应激诱导，以及内膜细胞与免疫细胞或间皮细胞共培养。

B22.3、检测指标

重点检测指标包括细胞增殖、黏附、侵袭、炎症因子、血管生成相关因子、氧化应激、纤维化相关蛋白和激素反应相关变化。

附录C 常见核心检测指标的设计思路

C1、细胞活力与细胞毒性

用于判断药物是否影响短期存活，常用方法包括四唑盐比色法、ATP发光法和活死染色。

C2、细胞增殖

用于判断药物是否抑制细胞扩增，常用方法包括EdU掺入检测、克隆形成实验和细胞计数。

C3、细胞死亡方式

用于区分凋亡、坏死、焦亡、铁死亡等不同死亡方式。

C4、迁移与侵袭

用于评价药物是否影响细胞运动、修复或转移能力，常用方法包括划痕实验、跨膜迁移实验和基质侵袭实验。

C5、屏障功能与通透性

用于判断药物是否改善上皮或内皮功能，常用方法包括跨上皮电阻测定、荧光示踪通透性实验和ZO-1、Occludin、Claudin等紧密连接蛋白检测。

C6、炎症与分泌功能

用于判断药物是否降低炎症输出，常用方法包括ELISA、qPCR和流式细胞术。

C7、纤维化与细胞外基质沉积

用于判断药物是否抑制细胞活化和基质沉积，常用指标包括α-SMA、Collagen I、FN1和收缩相关检测。

C8、代谢与线粒体功能

用于评价药物是否改善脂代谢、能量代谢和应激状态，常用方法包括脂滴染色、葡萄糖摄取、线粒体膜电位和ROS检测。

C9、免疫极化与免疫功能

用于判断药物是否改变免疫状态，常用方法包括流式分群、细胞因子谱分析、吞噬实验和杀伤实验。

C10、色素生成与皮肤屏障相关指标

适用于皮肤相关项目，常用指标包括黑色素含量、Tyrosinase活性、Filaggrin、Loricrin、ZO-1及创面修复相关指标。

附录D 细胞实验常用药物溶媒体系及溶媒使用要求

D1、常见药物溶媒体系

D1.1、水溶性体系

适用于水溶性较好的化合物，可采用无菌水、磷酸盐缓冲液、生理盐水或无血清培养基配制母液或工作液。该体系对多数贴壁细胞和悬浮细胞兼容性较好，优先级通常最高。

D1.2、DMSO体系

适用于脂溶性较高、难溶于水的化合物，是细胞实验中最常见的有机溶媒体系。建议先配制高浓度母液，再用培养基逐级稀释至目标浓度，并设置严格对应的溶媒对照组。

D1.3、乙醇体系

适用于部分天然产物、小分子化合物和部分疏水性成分。乙醇挥发性较强，配制和加样过程中应注意操作一致性，避免因挥发导致终浓度波动。

D1.4、甲醇体系

甲醇可用于部分化合物预溶，但对多数细胞的兼容性弱于DMSO和乙醇，因此更适合作为短时预溶媒，通常不建议作为终处理体系中的主要溶媒。

D1.5、丙酮体系

丙酮适用于少数特殊疏水性化合物的预溶，但细胞毒性和挥发性均较明显。常规细胞药效实验中使用频率较低，只有在化合物理化性质确有需要时才建议采用。

D1.6、表面活性剂辅助体系

对于极难溶化合物，可在低比例条件下结合Tween-80、PEG400或Poloxamer等助溶体系使用，但需事先评估其对细胞活力、膜稳定性和检测读数的影响，并单独设置助溶剂对照组。

D2、常见溶媒的终浓度上限建议

D2.1、DMSO终浓度要求

多数常规细胞实验建议DMSO终浓度控制在0.1%以下。对于较敏感细胞，如原代细胞、神经元、干细胞、屏障模型相关细胞和部分免疫细胞，建议进一步控制在0.05%以下。只有在已有预实验支持的情况下，才考虑短时间使用0.2%至0.5%的水平。

D2.2、乙醇终浓度要求

多数细胞实验建议乙醇终浓度控制在0.1%以下。对于敏感细胞或长时间处理实验，建议控制在0.05%以下，以降低对膜结构、代谢状态和挥发误差的影响。

D2.3、甲醇终浓度要求

多数情况下建议甲醇终浓度控制在0.05%以下。若细胞类型较敏感，建议进一步降低。甲醇更适合用于配制母液后再进行充分稀释，不宜在终处理体系中维持较高比例。

D2.4、丙酮终浓度要求

常规建议丙酮终浓度控制在0.05%以下。对于贴壁较弱或对有机溶媒较敏感的细胞，建议尽量避免使用，或采用更温和的替代溶媒体系。

D2.5、Tween-80、PEG400等助溶剂终浓度要求

助溶剂的可接受范围与细胞类型、处理时长和检测方法密切相关。多数项目建议从低于0.1%起始评估，并通过预实验确认细胞兼容性后再正式应用。对于屏障功能、膜电位、线粒体功能和高内涵成像类实验，助溶剂比例应控制得更低。

D3、溶媒使用的实验设计要求

D3.1、必须设置溶媒对照组

凡采用DMSO、乙醇、甲醇、丙酮或助溶剂体系处理时，均应设置与药物组溶媒终浓度一致的溶媒对照组，以区分药物效应与溶媒效应。

D3.2、母液浓度应尽量提高

在保证化合物稳定性和可操作性的前提下，应尽量提高母液浓度，以减少加药后溶媒带入量，从而降低溶媒本身对细胞状态和检测指标的干扰。

D3.3、不同项目需结合细胞类型重新确认上限

不同细胞类型对溶媒耐受度差异明显。原代细胞、神经细胞、干细胞、上皮屏障模型、内皮屏障模型和免疫细胞通常更敏感，应在正式实验前通过预实验确认溶媒安全范围。

D3.4、长时间给药需采用更严格标准

处理时间越长，溶媒累积影响越明显。对于24小时以上处理实验，建议采用更低的溶媒终浓度控制标准，并结合细胞形态、活力和背景信号变化进行综合判断。

D3.5、与检测体系兼容性需要单独评估

部分溶媒或助溶剂可能干扰荧光检测、发光检测、膜电位检测、线粒体功能检测和高内涵成像结果。因此在方案设计阶段，应将溶媒兼容性纳入检测体系评估范围。