服务定位

南京博恩生物可面向高校、科研院所、医院基础科研团队、医药企业和生物技术企业，提供标签蛋白 Pull-down 实验服务。服务内容可覆盖前期方案评估、标签体系选择、标签位置评估、构建策略制定、全长/截短体/点突变体设计、外源表达、表达验证、亲和富集、洗涤洗脱、Western blot 检测、结果分析、图版整理和完整中文报告交付。

标签蛋白 Pull-down 适用于外源标签蛋白互作验证、缺少成熟内源抗体条件下的蛋白互作研究、蛋白结构域功能分析、蛋白截短体结合区段定位、点突变体结合能力比较、信号通路关键节点复合物验证、药物处理前后互作变化比较，以及论文机制数据补充和项目汇报材料整理。

博恩生物提供的服务不只是执行 Pull-down 操作，而是更重视研究问题与实验路径之间的匹配。项目启动前，会围绕目标蛋白特性、标签类型、标签位置、表达体系、构建体设计、候选结合蛋白检测路径、背景控制和结果用途进行评估，帮助客户形成更具解释力的实验方案。

标签蛋白 Pull-down实验原理

标签蛋白 Pull-down 的核心思路，是为诱饵蛋白或候选蛋白引入可被亲和介质、磁珠或特异性抗体识别的标签，再借助对应体系富集带标签蛋白及其结合伙伴，最后通过 Western blot、银染、考染或质谱等方式检测互作结果。

常见标签体系包括 GST、His、FLAG、HA、Myc、Strep、HaloTag 等。GST 标签通常通过谷胱甘肽介质捕获，His 标签通常依赖金属螯合介质富集，FLAG、HA、Myc 等小表位标签多通过特异性抗体或标签磁珠体系进行富集，Strep 和 HaloTag 则可根据项目需求用于更高纯度或平台化互作研究。

标签蛋白 Pull-down 的实验逻辑通常是：先构建带标签的目标蛋白表达载体，再在合适体系中表达目标蛋白，随后通过标签对应的亲和体系捕获标签蛋白，并观察候选结合蛋白是否被同步富集。若候选蛋白在 Pull-down 产物中出现，而空标签、空载体或 beads-only 等对照中不出现或明显较弱，则可支持该互作关系具有一定特异性。

需要注意的是，标签蛋白 Pull-down 多用于外源标签体系下的互作验证和构建体比较。它能够较好地回答“带标签蛋白是否能够富集候选结合蛋白”“某个结构域是否参与结合”“某个突变是否影响结合能力”等问题。如果需要进一步证明细胞内天然状态下的互作关系，通常建议结合 Co-IP、内源 Co-IP、免疫荧光共定位或功能 rescue 实验共同判断。

博恩可提供的标签蛋白 Pull-down服务内容

1、外源标签蛋白互作验证

适用于客户已有候选互作蛋白，希望通过外源标签体系验证诱饵蛋白是否能够富集候选结合蛋白。该类项目适合机制研究早期验证、抗体条件不成熟的互作研究，以及后续 Co-IP 前的可行性确认。

2、GST Pull-down直接互作验证

GST 体系适合较经典的体外直接互作研究。可通过 GST-tagged bait protein 捕获候选 prey protein，判断两个蛋白之间是否具备直接结合能力。该路线常用于结构域互作、蛋白结合界面分析和体外直接结合验证。

3、FLAG / HA / Myc标签Pull-down

FLAG、HA、Myc 等小标签适用于外源表达后的统一检测和多构建体比较。该类标签相对灵活，便于全长、截短体、缺失体和点突变体在相同标签背景下横向比较。

4、His标签Pull-down或纯化后互作分析

His 标签更常用于蛋白纯化，也可根据项目需求用于部分 Pull-down 体系。该标签路径相对简洁，适合需要先获得重组蛋白、再进行互作验证或后续分析的项目。

5、Strep / HaloTag体系评估与实施

Strep 标签通常在纯度和特异性方面具有优势，适合背景控制要求较高的项目。HaloTag 体系适合部分平台化 Pull-down 或复杂互作研究，但因标签较大，需提前评估对蛋白结构、定位和功能的潜在影响。

6、全长蛋白与截短体比较

适用于判断目标蛋白的哪一段区域参与互作。通过统一标签体系构建全长蛋白和多个截短体，比较不同构建体拉下候选蛋白的能力，可帮助定位核心结合区段。

7、点突变体功能验证

适用于判断某个关键氨基酸、结构域位点、磷酸化位点、保守位点或功能突变是否影响蛋白互作。WT 与 Mut 构建体应尽量采用统一标签、统一表达体系和统一检测条件，便于横向比较。

8、药物或刺激处理前后互作变化比较

适用于分析药物处理、信号刺激、应激条件、突变背景或环境因素是否影响蛋白复合物形成、稳定性或解离。该类项目通常需要设置处理组与未处理组，并同步观察输入表达水平。

9、结果整理与报告交付

项目可交付构建体信息、标签信息、输入对照、Pull-down 结果图、截短体或突变体比较图、统计分析图、图注说明、结果描述、结论总结和完整中文报告。必要时可根据论文、课题汇报或项目申报需求进一步整理图版素材。

适用客户与项目场景

1、高校、医院、科研院所

适用于蛋白互作机制研究、结构域功能分析、蛋白截短体研究、突变体功能验证、论文机制数据补充、基金申请和课题结题材料准备。

2、医药企业

适用于靶点作用机制验证、候选药物对蛋白复合物影响研究、突变体功能评价、药物处理前后互作变化比较和研发项目机制支持。

3、生物技术企业

适用于标签蛋白功能验证、抗体应用验证、互作筛查、蛋白工程验证、技术平台开发支持和产品机制说明。

4、缺少成熟内源抗体的项目

当目标蛋白缺少适合 Co-IP 的成熟内源抗体时，可先采用标签蛋白 Pull-down 进行外源体系验证，初步判断互作关系是否成立。

5、需要多构建体统一比较的项目

当客户需要比较全长、截短体、缺失体或点突变体之间的结合差异时，标签蛋白 Pull-down 具有较好的体系一致性，更利于控制变量和结果解释。