服务定位

南京博恩生物可面向高校、科研院所、医院基础科研团队、医药企业和生物技术企业，提供 Western blot 实验外包服务。服务内容可覆盖前期方案评估、目标蛋白与检测形式判断、抗体筛选、样本处理建议、蛋白提取、蛋白定量、SDS-PAGE 电泳、转膜、封闭、抗体孵育、显影成像、灰度分析、统计作图、图版整理和完整中文报告交付。

Western blot 适用于常规总蛋白表达检测、磷酸化蛋白检测、剪切体或活化形式蛋白检测、信号通路验证、药效与作用机制研究、核蛋白/膜蛋白/线粒体蛋白检测、分泌蛋白检测、外泌体或细胞外囊泡标志物检测等多类项目。

对于常规种属、常规通路所需抗体，博恩生物可根据项目情况提供抗体支持；特殊种属、特殊位点、稀有蛋白、低丰度蛋白或特殊修饰位点需在项目前期单独评估。项目交付可包括原始条带图、未裁剪整膜全长蛋白分子量标准曝光图、灰度值数据、归一化分析结果、统计分析图、图注说明、发表级图版素材和完整中文报告。

Western blot实验原理

Western blot 是一种经典的蛋白检测技术，主要通过凝胶电泳按分子量分离蛋白，再将蛋白转移至 PVDF 或 NC 膜上，利用特异性抗体识别目标蛋白，最后通过化学发光、荧光或其他显影方式获得目标条带信号。

Western blot 的核心价值在于能够提供蛋白表达量、分子量、剪切体、磷酸化或其他翻译后修饰、蛋白活化形式等信息。与 qPCR 仅反映 mRNA 水平不同，Western blot 更适合回答蛋白层面的问题，例如蛋白是否表达、是否被磷酸化、是否发生剪切、是否出现活化形式、是否存在亚型或分子量变化。

需要注意的是，Western blot 主要提供蛋白条带和相对定量信息，不直接提供组织定位、细胞亚群来源或空间分布。如果研究目标是组织定位，通常建议结合免疫组化；如果研究目标是细胞内定位、核转位或共定位，建议结合免疫荧光；如果研究目标是单细胞群体比例或免疫表型，建议结合流式细胞术。

博恩可提供的Western blot服务内容

1、常规总蛋白表达检测

适用于检测目标蛋白在不同处理组、不同组织、不同细胞模型或不同药物干预条件下的表达变化。可进行目标蛋白与内参或总蛋白归一化分析。

2、磷酸化蛋白检测

适用于分析信号通路是否激活，例如 p-AKT、p-ERK1/2、p-STAT3、p-p65、p-AMPK、p-mTOR、p-SMAD2/3 等。磷酸化蛋白通常建议与对应 total 蛋白同步检测，以提高结果解释准确性。

3、切割体或活化形式蛋白检测

适用于凋亡、焦亡、补体激活、蛋白酶活化等研究，例如 cleaved-CASP3、cleaved-PARP1、cleaved-CASP8、cleaved-GSDMD、active β-catenin、active caspase 等。

4、信号通路验证

适用于 PI3K-AKT、mTOR、MAPK/ERK、JAK-STAT、NF-κB、TGF-β/SMAD、Wnt/β-catenin、p53、凋亡、自噬、铁死亡、DNA 损伤、EMT、内质网应激、氧化应激、线粒体质量控制、炎症小体、干扰素抗病毒反应等经典通路检测。

5、药效与作用机制研究

适用于候选药物处理后靶点蛋白、通路蛋白、细胞死亡蛋白、炎症相关蛋白、纤维化相关蛋白、代谢相关蛋白和细胞器功能相关蛋白变化分析。

6、分级提取与亚细胞组分检测

适用于核/胞浆分离、膜蛋白检测、线粒体蛋白检测和核转位相关研究。例如 NF-κB p65 核转位、β-catenin 核转位、YAP/TAZ 核转位、STAT3 核转位、HIF-1α 核蛋白变化、膜受体表达、线粒体相关蛋白变化等。

7、自噬通量相关检测

适用于 LC3-I/LC3-II、p62/SQSTM1、BECN1、ATG5、ULK1 等组合检测。自噬研究不宜只凭单一 LC3 或 p62 结果下结论，通常需要结合自噬流、溶酶体功能或干预验证共同判断。

8、DNA损伤与应激相关检测

适用于 γH2AX、p-ATM、p-ATR、p-CHK1、p-CHK2、p-p53、p21、GADD45A 等 DNA 损伤、复制压力和细胞应激相关指标检测。

9、受体、黏附与迁移相关蛋白检测

适用于 RTK、FAK/Src、Integrin、MMPs、EMT marker、RhoA/ROCK 等细胞迁移、侵袭、黏附和基质重塑相关机制分析。

10、分泌蛋白、上清样本与外泌体标志物检测

可根据项目评估培养上清、分泌蛋白、外泌体或细胞外囊泡样本的 Western blot 检测。上清或外泌体样本的归一化策略与细胞裂解液不同，需在前期方案中单独确认。

适用客户与项目场景

1、高校、医院、科研院所

适用于课题验证、分子机制研究、蛋白表达检测、通路验证、论文结果整理、结题汇报和项目申报材料准备。

2、医药企业

适用于靶点机制验证、药效通路验证、候选药物筛选、毒理机制分析、药物作用机制补充和细胞/动物模型蛋白指标检测。

3、生物技术企业

适用于产品功能验证、信号通路评估、研发项目支持、细胞模型确认、蛋白标志物检测和机制数据整理。

4、已有qPCR或表型结果需要蛋白层验证的项目

适合通过 Western blot 补充蛋白表达、磷酸化、剪切、通路激活或功能状态证据。

5、需要发表级图版与可追溯资料的项目

适合需要未裁剪整膜图、分子量标记、灰度值数据、统计图、图注和完整报告的科研或研发项目。