南京博恩生物技术有限公司面向高校、科研院所、医药企业与生物技术企业，提供从方案评估、引物设计、样本前处理、核酸提取、逆转录、PCR/qPCR 扩增到结果分析的一站式 PCR 实验外包服务。服务覆盖常规 PCR、RT-PCR、RT-qPCR、荧光定量 PCR 基因表达分析、病原体核酸检测、基因分型、拷贝数分析、RNA 干扰验证、药效分子核心指标检测及发表级数据整理。

PCR 本质上是 核酸扩增技术。常规 PCR 主要用于扩增和鉴定特定 DNA 片段；qPCR 用于对核酸靶标进行实时检测与定量；RT-qPCR 则先将 RNA 逆转录为 cDNA，再进行实时定量扩增，因此是科研中最常用的 mRNA 表达分析方法。

交付包含原始扩增数据、Ct/Cq 数据表、相对定量结果表、统计分析图及完整中文报告。
项目完成后提供终身售后支持，针对数据整理、结果解释、投稿补充材料准备及后续问题持续响应。

PCR 常见认识误区

PCR 检测的是 核酸，不是蛋白。
如果研究目标是 mRNA 是否上调或下调，通常使用 RT-qPCR；如果研究目标是 蛋白是否表达、是否发生磷酸化、切割或定位变化，则应优先考虑 Western blot、免疫组化或免疫荧光，而不是 PCR。

因此，PCR 适合回答的是：

• 目标基因是否存在

• 目标基因的转录水平是否变化

• 某个样本中是否检出特定核酸序列

• 某个位点是否发生分型差异

• 某个样本的拷贝数是否变化

PCR 不直接回答：

• 蛋白是否发生磷酸化

• 蛋白是否被切割

• 蛋白分子量是否正确

• 蛋白是否进入细胞核

• 蛋白在哪类细胞或组织中表达

这些问题分别更对应 Western blot、免疫组化、免疫荧光和流式细胞术。

服务适用场景

本服务适用于基因表达分析、药物刺激前后转录水平比较、炎症因子 mRNA 检测、信号通路下游转录 readout 检测、病原体核酸检测、基因分型、SNP/等位基因判定、拷贝数分析、RNA 干扰验证、细胞模型验证及临床前药效研究。

适用客户类型

• 高校与科研院所：基因表达检测、课题验证、论文数据补充

• 医药企业：药效分子 readout、靶点转录响应、病原体/生物标志物核酸检测

• 生物技术企业：产品功能验证、核酸检测开发、批量样本定量分析

适用研究方向

• 基因表达变化分析

• 炎症与免疫相关转录因子/细胞因子 mRNA 检测

• 药物干预前后转录 readout 比较

• 病原体核酸检测

• SNP/基因分型

• 拷贝数和相对/绝对定量分析

• RNA 干扰与基因敲降验证

服务流程

客户发送方案 → 方案评估 → 问题反馈与优化 → 正式报价 → 签订合同 → 支付预付款 → 开始实验 → 提交 PDF 版结果报告 → 支付尾款 → 提交完整报告。

流程说明

1. 客户发送方案
提交研究目的、检测基因、样本类型、物种信息、分组设计、处理条件及参考文献。

2. 方案评估
评估检测目标是否适合 PCR/qPCR，确认是常规 PCR、DNA qPCR 还是 RT-qPCR，确认样本类型、参考基因、引物策略和定量方式。

3. 问题反馈与优化
指出方案中可能存在的问题，如把蛋白活化问题误设为 PCR 检测、参考基因选择不合理、引物设计不适合剪接体区分、样本 RNA 质量风险高、检测对象更适合 Western blot 等，并进行优化。

4. 正式报价
根据样本数量、检测基因数量、是否单基因或多基因、是否需核酸提取、是否需逆转录、是否需引物设计与验证、是否需发表级图版整理等出具正式报价。

5. 签订合同并支付预付款
确认合作内容、周期及交付标准。

6. 开始实验
进入样本登记、核酸提取、质量评估、逆转录、PCR/qPCR 扩增、数据分析和统计流程。

7. 提交 PDF 结果报告
实验完成后先提交 PDF 版结果报告供客户确认。

8. 支付尾款并提交完整报告
尾款支付完成后，提交完整终版报告、原始数据、扩增曲线、熔解曲线、Ct/Cq 表、统计图及整理版发表素材。

样本要求

qPCR 结果高度依赖样本核酸质量。

样本要求表

样本说明

• RNA 样本应尽量避免 RNase 污染

• 不同样本类型的参考基因稳定性不同，不能机械固定用 GAPDH 或 ACTB

• 表达量特别低的靶标需预先评估灵敏度与引物效率

• 病原体检测、分型、拷贝数分析与基因表达分析的样本前处理要求并不相同

交付内容

交付内容包含中文版实验报告、样本信息、引物信息、实验方法、核酸质量说明、对照设置说明、原始 Ct/Cq 数据、扩增曲线、熔解曲线、相对定量结果表、统计分析图、图注、结果描述、结论总结及完整终版报告。对需要发表或汇报使用的项目，可同步整理为适合论文与 PPT 使用的数据图版。

标准交付清单

• 中文版实验报告

• 样本与引物信息

• 实验方法学描述

• 核酸质量说明

• 原始 Ct/Cq 数据

• 相对定量结果表

• 统计分析图

• 图注与结果说明

• 发表级图版整理

• 完整终版报告

售后支持

项目完成后提供终身售后支持，包括：

• 结果解释

• Ct/Cq分析说明

• 图版整理

• 投稿补充材料支持

• 后续答疑与补充说明

周期与报价方式

常规 RT-qPCR 项目周期通常为 3–7 个工作日。涉及多基因 panel、样本前处理、RNA 提取、引物设计与验证、复杂样本基质、复测或发表级图版整理的项目周期相应延长。与 Western blot 和免疫荧光相比，PCR/qPCR 的标准化程度通常更高，因此在目标和样本条件明确时，周期通常更短。

报价因素

• 样本数量

• 检测基因数量

• 是否需核酸提取

• 是否需逆转录

• 是否需引物设计与验证

• 是否需多重检测或 panel 设计

• 是否需复孔、重复实验和补测

• 是否需统计分析与发表级图版整理

常见问题

PCR 主要检测什么？
PCR 主要检测核酸。常规 PCR 更偏向特定 DNA 片段扩增；qPCR 用于核酸实时定量；RT-qPCR 用于 RNA 经逆转录后的定量检测。Thermo Fisher 明确指出 qPCR 用于核酸靶标的检测和定量，RT-qPCR 用于 RNA 的检测与定量。

PCR 能检测蛋白表达吗？
不能直接检测蛋白。PCR 只能检测 DNA 或 RNA 水平。若研究问题是蛋白表达、蛋白活化、磷酸化、切割或定位，应选择 Western blot、免疫组化、免疫荧光或流式细胞术。

为什么很多通路不适合只做 PCR？
因为很多通路关键变化发生在蛋白活化层面而非转录层面。例如 AKT、ERK、STAT3、p65、AMPK、mTOR 等常见 readout 更依赖磷酸化状态，qPCR 不能替代这些蛋白层面的判断；PCR 更适合检测其下游转录输出基因。

PCR 和 qPCR、RT-qPCR 的区别是什么？
常规 PCR 主要用于扩增与定性判断；qPCR 可实时监测扩增过程并进行定量；RT-qPCR 则用于 RNA 的逆转录后定量分析。

为什么参考基因不能固定只用 GAPDH？
因为参考基因的稳定性依赖具体样本类型和处理条件。

结果是否可直接用于发表？
交付包含原始数据、统计图、图注说明及整理版图表，可直接用于论文、汇报和结题材料整理。

PCR 原理

PCR 的核心原理是利用引物与模板特异性结合，在 DNA 聚合酶作用下经过变性、退火和延伸循环，指数级扩增目标核酸片段。qPCR 在此基础上引入荧光染料或探针，实现扩增过程的实时检测和定量。

PCR 实验步骤与逐项说明

1. 样本处理与核酸提取

根据样本类型提取 RNA 或 DNA，并尽量降低降解与污染风险。对基因表达分析而言，高质量 RNA 是前提。

2. 核酸质量评估

检测浓度、纯度和完整性。Bio-Rad 的 qPCR controls 资料将 RNA 质量评估列为可靠 qPCR 数据的重要环节。

3. 逆转录

若检测对象为 RNA，则需先将 RNA 逆转录为 cDNA。RT-qPCR 的核心就在于“先逆转录、再定量扩增”。

4. 引物/探针设计与验证

根据目标序列、转录本结构和应用目的设计引物；必要时区分不同剪接体或跨外显子边界。引物特异性和扩增效率直接决定结果可靠性。MIQE 2.0 也强调 assay design 与 validation。

5. 反应体系建立

确定使用 SYBR Green 还是探针法。Thermo Fisher 说明，SYBR 法依赖染料结合双链 DNA，而 TaqMan 探针法依赖特异性探针信号。

6. 设置对照

常见对照包括：

• 无模板对照（NTC）

• 无逆转录对照（NRT）

• 阳性对照

• DNA 污染控制

• 参考基因/内参对照

7. 扩增与实时检测

在 qPCR 仪中进行扩增，实时记录荧光变化，获取扩增曲线和 Ct/Cq 值。

8. 熔解曲线或特异性验证

SYBR 体系通常需查看熔解曲线，以判断是否存在非特异扩增或引物二聚体。

9. 数据分析

根据实验目的进行相对定量或绝对定量分析；常见相对定量会结合参考基因进行归一化。

内参基因选择表

内参基因说明

• 参考基因应在当前实验条件下稳定表达

• 最佳实践是评估多个候选参考基因，而不是固定只用一个

• 若条件允许，采用两个及以上稳定参考基因进行归一化通常更稳妥。

常见 PCR 应用场景表

PCR 与其他常见实验的对比分析

实验选择逻辑

南京博恩生物技术有限公司提供面向科研客户与医药企业的 PCR 实验外包服务，覆盖常规 PCR、RT-PCR、RT-qPCR、基因表达分析、病原体核酸检测、基因分型、拷贝数分析及发表级数据整理。项目交付包含原始Ct/Cq 结果表、统计分析图及完整中文报告，并提供终身售后支持。
客户提交方案后，项目按“方案评估—问题反馈—报价签约—实验执行—PDF 结果确认—完整报告交付”的标准流程推进。交付结果可直接用于课题研究、论文整理、项目申报与结题汇报。