代谢法、DNA 合成法、长期克隆形成法、单细胞分裂追踪与动态分析平台的一体化服务，帮助客户更准确回答“细胞到底有没有真正增殖”这一核心问题。南京博恩生物技术有限公司面向高校、科研院所、医药企业与生物技术企业，提供覆盖细胞活力/增殖检测、DNA 合成检测、长期克隆形成检测、单细胞分裂追踪、免疫增殖检测和高内涵成像分析的系统化服务。我们不是将“增殖检测”简单理解为完成某一项常规实验，而是围绕客户真实的研究目的，完成方法选择、平台匹配、实验执行、结果分析和后续研究衔接，帮助客户建立更清晰、更可靠、更适合发表和汇报的研究证据链。

导读

一、公司服务定位与核心价值
二、服务内容与应用场景
三、服务流程与交付内容
四、公司综合优势
附录A 常用检测方法整合说明
附录B 不同研究目的下的方法选择建议
附录C 常见误区、实验设计建议与平台匹配
附录D 推荐组合方案

一、公司服务定位与核心价值

南京博恩生物技术有限公司面向高校、科研院所、医药企业与生物技术企业，提供覆盖细胞活力与增殖检测、DNA 合成检测、长期克隆形成检测、单细胞分裂追踪、免疫增殖检测及高内涵成像分析的一体化服务。

公司围绕客户真实研究目标提供系统化支持，服务内容涵盖方法选择、平台匹配、实验执行、结果分析及后续研究衔接，帮助客户建立更清晰、更可靠、更适合论文发表与项目汇报的研究证据链。

1.1 服务定位

细胞增殖检测是细胞实验中常见的重要需求，但不同项目拟回答的问题并不相同。有的项目关注活细胞数量是否变化，有的关注 DNA 合成是否增加，有的关注细胞是否进入 S 期，还有的关注长期克隆形成能力、持续生长潜能或特定亚群是否连续分裂。

基于这一特点，公司将“细胞增殖检测”视为一个围绕研究问题展开的综合技术服务体系，而非单一实验项目。服务重点在于先明确问题，再匹配合适方法，再形成可解释、可复核、可汇报的结果体系。

1.2 核心价值

公司专业价值主要体现在以下几个方面：

（1）围绕研究问题设计实验路线

公司首先帮助客户明确研究问题属于短期活力变化、DNA 合成、长期克隆潜能，还是免疫细胞分裂代数，再据此配置方法与平台，使实验路线更契合研究目标。

（2）强调多层级指标组合验证

单一检测指标往往难以完整支撑研究结论。公司更重视交叉验证，例如短期药物筛选可先采用 CCK-8 或 ATP 发光法进行初筛，再结合 EdU 或克隆形成实验进行验证，从而提高结果的可靠性与解释力。

（3）重视结果解释逻辑

代谢活性变化并不一定等同于真实增殖变化。部分处理因素会显著影响线粒体酶活、代谢状态、静息状态或自噬水平，因此公司在实验设计和结果分析阶段会重点区分“代谢变化”与“真实增殖变化”。

（4）提供与研究目的匹配的完整平台路线

公司可根据项目目标灵活配置常规板式检测、显微成像、流式细胞术、高内涵自动分析及动态监测平台。不同平台分别适用于高通量筛选、单细胞与亚群分析、长期生长潜能评估及动态过程观察等不同研究场景。

（5）提供适用于论文和汇报的研究支持

除实验执行外，公司还关注结果是否足以支持论文结论、是否需要增加长期验证、是否需要补充单细胞层面的证据。项目完成后，可按需求提供结果报告、原始数据、统计图表、图注说明及适合论文与汇报使用的整理版素材。

二、服务内容与应用场景

公司可根据不同研究目标提供以下服务内容。

2.1 短期细胞活力与增殖检测

针对短周期、板式化、高通量及药物筛选初步评价需求，公司可提供 MTT、CCK-8、XTT、MTS、WST 类方法、Resazurin/Alamar Blue、ATP 发光法、SRB 及直接细胞计数等检测服务。

该类方案适合在 24 至 72 小时内快速评估细胞状态变化，常用于药物筛选、细胞毒性评价及常规增殖比较。

2.2 DNA 合成检测

针对“细胞是否进入 DNA 复制阶段”这一更直接的增殖问题，公司可提供 EdU、BrdU 及相关流式或显微成像方案。

该类方案适合细胞周期研究、药物作用研究和增殖机制研究，也适合需要与免疫标记或核染色联用的项目。

2.3 长期增殖与克隆形成检测

针对长期生长潜能、自我更新能力、放疗或化疗后持续存活能力等问题，公司可提供克隆形成实验、克隆存活实验及相关定量分析。

该类方法更适合评价单细胞长期增殖能力和持续克隆扩增能力，是长期增殖检测指标中具有代表性的技术路线。

2.4 免疫细胞与单细胞分裂追踪检测

针对免疫细胞扩增、细胞分裂轮次及特定亚群连续分裂问题，公司可提供 CFSE 稀释法、BrdU 或 EdU 流式检测、免疫亚群联合增殖检测等方案。

该类服务有助于客户从群体平均结果进一步深入到单细胞和亚群层面的真实变化。

2.5 成像、动态监测与高内涵增殖分析

针对多参数药效评价、动态过程观察及联合表型分析需求，公司可提供 EdU 成像、高内涵自动计数、Ki-67 或 PCNA 免疫成像、实时无标记阻抗分析及活细胞时间序列成像等方案。

此类方案可将增殖指标与细胞形态、核形态、细胞毒性及动态变化过程整合分析，适合需要更高解释力的项目。

三、服务流程与交付内容

3.1 服务流程

项目通常按照以下流程开展：客户提交方案，项目组进行方案评估，正式报价，签订合同，支付预付款，开展实验，提交 PDF 版结果报告，支付尾款，提交完整终版报告。

客户提交研究背景、研究目的、细胞类型、预期应用场景、处理条件及参考文献后，公司将围绕项目目标完成方法评估与路线设计，包括以下内容：

（1）判断当前问题更适合采用代谢法、DNA 合成法、克隆形成法还是单细胞分裂追踪法；

（2）判断更适合使用吸光、发光、显微、流式、高内涵还是动态监测平台；

（3）判断是否需要同时设置短期与长期检测指标；

（4）判断是否需要针对免疫细胞、原代细胞或异质性群体进行特殊设计。

3.2 交付内容

项目完成后，可根据需求交付以下材料：

（1）PDF 版结果报告；

（2）完整终版报告；

（3）原始数据；

（4）统计图表；

（5）图注说明；

（6）适合论文和汇报使用的整理版素材。

四、公司综合优势

南京博恩生物技术有限公司面向高校、科研院所、医药企业和生物技术企业，提供覆盖细胞活力与增殖检测、DNA 合成检测、长期克隆形成分析、单细胞分裂追踪及动态与高内涵增殖分析的一体化实验服务。

公司的核心优势在于帮助客户准确界定研究问题、匹配检测方法、组合多层级检测指标，并对结果作出更科学、更审慎、更适合发表的解释。无论是药物筛选、毒性评价、肿瘤增殖研究、放疗化疗响应、免疫细胞扩增还是动态药效观察，公司均可围绕细胞增殖检测建立高质量、成体系的体外研究支持方案。

附录A 常用检测方法整合说明

A1 代谢活性与活细胞数量评估方法

A1.1 MTT

MTT 是经典的四唑盐代谢法，其原理为活细胞将 MTT 还原为不溶性甲臜结晶，再经溶解后进行吸光度检测。该方法适合基础细胞活力和药物毒性初筛，文献基础较广、使用历史较长，但需要额外结晶溶解步骤，本质上仍属于代谢活性的替代指标，更适合评估活细胞代谢状态是否变化。

A1.2 CCK-8（WST-8）

CCK-8 采用 WST-8 体系，细胞内脱氢酶可将其还原为水溶性甲臜产物。该方法操作简便、灵敏度较高、无需溶解结晶，适合常规细胞增殖比较、药物筛选及细胞毒性评价。但由于其结果仍依赖细胞代谢酶活，容易受脱氢酶活性、培养条件及部分还原性化合物影响，因此更适合短期比较和筛选。

A1.3 XTT / MTS / WST-1

XTT、MTS、WST-1 等方法同样属于水溶性四唑盐代谢法，原理与 CCK-8 接近，适合 96 孔或 384 孔板批量检测。其优势在于操作较 MTT 更方便，便于建立高通量流程；局限在于结果仍属于代谢检测指标，易受细胞代谢状态和化合物干扰影响。

A1.4 Resazurin / Alamar Blue

Resazurin/Alamar Blue 属于常见代谢活性检测方法，依赖活细胞将 Resazurin 还原为具有荧光或显色信号的 Resorufin。该方法一步完成、灵敏度较高、对细胞毒性较低，适合药物筛选和细胞活力评估。其结论解释逻辑与 CCK-8 类似，更适合作为活细胞状态或代谢活性的替代指标。

A1.5 ATP 发光法

ATP 发光法通过定量 ATP 作为活细胞指标，具有灵敏度高、均质化程度好、适合高通量的特点，尤其适合低细胞数样本、快速药筛及对检测灵敏度要求较高的项目。其检测结果更接近细胞活力和代谢状态，在解释时需与研究目标相匹配。

A1.6 SRB

SRB 法通过酸性条件下与细胞总蛋白结合，反映细胞总蛋白量或生物量变化。该方法成本较低、终点稳定，适合大规模药物敏感性和细胞毒性评估，尤其适用于大批量板式筛选。其步骤较代谢法更繁琐，且更偏向生物量检测指标。

A1.7 直接细胞计数

直接细胞计数是较接近“真实细胞数是否增加”这一问题的方法，可通过显微镜或自动计数仪直接统计细胞数量。其优势在于结果直观、概念清晰，适合基础增殖研究、原代细胞研究和培养条件优化；局限在于通量有限、人工成本较高。

A1.8 台盼蓝活死计数

台盼蓝活死计数可同时反映细胞总数和存活率，方法简单、结果直观，适合基础培养和毒性评估。其不足在于对早期损伤、轻度代谢抑制及细胞周期变化不够敏感，更适合作为基础判断或辅助验证方法。

A2 DNA 合成与细胞周期活跃状态评估方法

A2.1 EdU

EdU 通过掺入新合成 DNA，并借助点击化学进行检测，可直接回答细胞是否进入 DNA 合成阶段。其优势在于灵敏度高、检测速度快、无需像 BrdU 那样进行较强 DNA 变性，更适合与其他荧光标记、多重免疫染色及高内涵成像联用。EdU 特别适合增殖机制研究、药物作用研究和细胞周期研究。

A2.2 BrdU

BrdU 是经典的 DNA 合成检测方法，通过掺入 DNA 后再进行抗体检测，可用于显微镜、流式和免疫组织化学分析。该方法成熟稳定、应用广泛，适合流式联合分析和组织水平检测。其主要局限在于通常需要 DNA 变性或酶处理以暴露抗原位点，可能对样本结构和后续多重标记兼容性产生影响。

A2.3 Ki-67

Ki-67 是经典的增殖相关核蛋白标志物，更适合反映细胞是否处于活跃细胞周期状态，常用于组织病理、肿瘤标本及细胞增殖状态评估。它适合组织定位、病理评估及细胞状态判读，但并非直接的 DNA 合成指标。

A2.4 PCNA

PCNA 是 DNA 复制相关核蛋白，适合评价复制活跃状态变化，常用于组织和细胞复制状态分析。其优势在于可用于病理及成像配套分析，但由于 PCNA 同时与 DNA 复制和修复过程相关，解释时应结合实验背景和其他检测指标。

A3 长期增殖与单细胞分裂追踪方法

A3.1 克隆形成实验

克隆形成实验的核心在于观察单细胞形成克隆的能力，更适合回答长期增殖能力、持续生长潜能和处理后长期存活能力是否发生变化。该方法特别适用于放疗、化疗、肿瘤长期生长和基因干预研究。与短期代谢法相比，克隆形成实验更能反映细胞再生长能力是否真正受到影响。

A3.2 CFSE 稀释法

CFSE 稀释法通过荧光染料在细胞分裂过程中逐代稀释的原理，追踪细胞分裂轮次，能够直接给出细胞分裂代数。该方法尤其适合 T 细胞、NK 细胞及其他免疫细胞的增殖研究，可提升对单细胞行为和亚群扩增的解析能力。

A4 动态与多参数增殖分析方法

A4.1 实时无标记阻抗法

实时无标记阻抗法通过微电极检测细胞贴壁、形态和增殖过程中的阻抗变化，实现对细胞生长过程的连续监测。该方法无需染料标记，能够动态观察药物作用过程，并连续记录细胞增殖与贴壁状态变化，适合动态药效评价和连续过程监测。

A4.2 高内涵 EdU / 核计数

高内涵 EdU 或核计数方案能够在成像基础上同时分析 DNA 合成、细胞数、核形态和细胞状态，适合药物筛选、复杂表型研究和组合检测指标设计。其优势在于自动化、多参数、可实现中高通量，并便于形成图像化结果。

A4.3 活细胞时间序列成像

活细胞时间序列成像可连续追踪细胞分裂和群体扩增过程，适合动态药效研究、生长动力学分析和细胞行为观察。与终点检测相比，该方法更强调过程信息，可帮助研究者观察不同时间点的变化轨迹。

附录B 不同研究目的下的方法选择建议

B1 短期药物筛选

若研究目标是进行高通量、快速比较的短期药物筛选，通常推荐采用 CCK-8、ATP 发光法、Resazurin/Alamar Blue 和 SRB。必要时可补充直接计数，以提高结果解释力。

B2 短期细胞毒性评价

若重点是快速判断活细胞变化，推荐采用 CCK-8、ATP 发光法、SRB、Resazurin/Alamar Blue 及直接计数的组合。设计与分析过程中应注意区分“代谢受到抑制”与“细胞真实死亡”两类不同结论。

B3 判断是否进入 DNA 合成期

若研究目标是判断细胞是否进入 S 期或 DNA 合成是否发生，EdU 和 BrdU 是更直接的方法。单独使用 CCK-8 或 ATP 发光法通常不足以回答这一问题。

B4 判断长期增殖与持续生长能力

若研究目标是评价放疗、化疗、基因干预或长期药物处理后的持续生长能力，克隆形成实验更具代表性。若仅依赖短期代谢法，往往难以准确反映长期克隆形成潜能。

B5 判断免疫细胞分裂轮次与亚群差异

若研究对象为免疫细胞扩增和分裂轮次，CFSE 稀释法是优先选择。若需要进一步分析亚群特征，可结合 BrdU、EdU 流式或 Ki-67 分群分析。

B6 判断组织或细胞中的增殖状态

若研究场景涉及组织定位、病理分析或细胞成像，Ki-67 和 EdU 更具优势。Ki-67 更适合描述增殖相关状态，EdU 更适合直接判断细胞是否进入 DNA 合成阶段；PCNA 可作为复制活跃状态的辅助参考。

B7 需要连续观察增殖动力学时

若研究目标是观察药物处理后的连续变化过程、增殖拐点或生长曲线差异，实时无标记阻抗法和活细胞时间序列成像更合适。这类方法的价值在于能够提供时间维度信息，而不仅是单一终点结果。

附录C 常见误区、实验设计建议与平台匹配

C1 常见误区与实验设计建议

C1.1 不要将活性与增殖完全等同

MTT、CCK-8、ATP 发光法、Resazurin/Alamar Blue 更接近代谢或活细胞状态，并不直接等同于 DNA 合成。设计方案时应先明确研究目标对应的问题类型。

C1.2 时间尺度应与研究问题匹配

24 至 72 小时的检测更适合短期检测指标，而 1 至 2 周甚至更长周期的方法更适合评价长期生长潜能和克隆形成能力。

C1.3 免疫细胞和异质群体宜优先考虑单细胞方法

若研究对象包含异质性较强的细胞群体或需要分析具体亚群，EdU、BrdU 流式、CFSE 和 Ki-67 分群等单细胞方法通常更合适。

C1.4 建议采用两类以上检测指标交叉验证

例如，可采用 CCK-8 或 ATP 发光法进行初筛，再结合 EdU、克隆形成或高内涵成像进一步验证。这样既能提高数据可信度，也有利于后续论文发表与项目汇报。

C2 平台选择与应用匹配

吸光酶标平台适合 MTT、CCK-8、SRB、Resazurin/Alamar Blue 以及 XTT、MTS、WST-1 等比色方法，优势在于通量高、成本可控，适合常规药物筛选和毒性检测。

发光酶标平台主要用于 ATP 发光法，灵敏度较高，更适合自动化筛选和低细胞数样本。

倒置显微镜和自动计数仪适合直接细胞计数和台盼蓝检测，结果直观，适合基础增殖研究和培养优化。

荧光显微镜适合 EdU、BrdU、Ki-67 和 PCNA 等荧光标记分析，可兼顾定位与形态观察。

共聚焦显微镜适合更高分辨率的 EdU 联合多重标记和 Ki-67 共定位分析。

流式细胞术适合 BrdU、EdU、CFSE、Ki-67 等单细胞定量和多参数分群，尤其适合免疫细胞及复杂群体研究。

高内涵成像平台适合 EdU、核计数和增殖联合凋亡分析，适用于多参数自动分析和中高通量项目。

实时无标记阻抗分析平台适合动态过程连续监测，活细胞成像平台更适合直接观察生长曲线和增殖动力学。

附录D 推荐组合方案

D1 短期药物筛选项目

建议采用 CCK-8、ATP 发光法或 Resazurin/Alamar Blue 进行快速初筛，并根据需要补充 SRB 或直接计数。

D2 细胞周期与 DNA 合成研究

建议采用 EdU 或 BrdU 作为主方法，并结合周期流式或 Ki-67 分析增强结论。

D3 放疗、化疗及长期药物处理研究

建议采用短期活力检测方法与克隆形成实验联合设计，以同时覆盖短期变化与长期生长能力。

D4 免疫细胞扩增研究

建议采用 CFSE 稀释法结合 EdU、BrdU 流式或 Ki-67 分群，从分裂轮次和亚群差异两个层面进行分析。

D5 动态药效研究

建议采用实时无标记阻抗法或活细胞时间序列成像，并结合终点法进行验证，以兼顾过程信息与终点证据。