南京博恩生物技术有限公司面向高校、科研院所、医药企业与生物技术企业，提供从方案评估、抗体筛选、裂解条件优化、免疫沉淀、洗脱检测到结果分析的一站式免疫共沉淀实验外包服务。服务覆盖内源性蛋白互作检测、外源标签蛋白互作验证、蛋白复合物成员验证、蛋白翻译后修饰富集检测、修饰后再做 Western blot 分析、药物处理前后蛋白互作变化比较、蛋白截短体结合分析及发表级数据整理。

免疫共沉淀是基于抗体与目标蛋白的特异性结合，将目标蛋白及其结合伙伴一并富集下来，再通过 Western blot 或其他下游方法进行检测的实验技术。

交付包含原始条带图、输入对照、IP 组与 IgG 对照结果图、完整中文报告。
项目完成后提供终身售后支持，针对结果解释、图版整理、投稿补充材料准备及后续问题持续响应。

服务适用场景

本服务适用于蛋白—蛋白相互作用验证、信号通路关键节点结合关系分析、药物处理前后互作变化比较、转录因子与辅因子复合物验证、受体与下游分子结合研究、标签蛋白 pull-down 验证、蛋白复合物成员筛查前验证，以及蛋白翻译后修饰水平分析，如泛素化、磷酸化、乙酰化、甲基化、SUMO 化等修饰的富集检测。

除蛋白—蛋白相互作用验证和翻译后修饰分析外，Co-IP 还广泛用于：

• 蛋白截短实验后的结合区域分析

• 结构域功能验证

• 不同突变体或缺失体对结合能力影响的比较

• 受体胞内段、转录因子功能结构域、衔接蛋白关键结合区段的验证

在这类实验中，通常会构建不同长度或不同结构域的蛋白截短体，随后通过 Co-IP 比较各截短体是否仍能拉下目标互作蛋白，从而判断哪一段区域对蛋白结合是必需的。这一思路尤其适用于转录因子与辅因子结合区域鉴定、受体胞内区与下游衔接分子的结合区域分析、激酶与底物或调节蛋白的结合位点初步定位等场景。相关 Co-IP 方法学资料都强调，Co-IP 不仅可验证互作是否存在，也常用于比较不同构建体在细胞内的结合能力差异。

适用客户类型

• 高校与科研院所：蛋白互作机制研究、信号通路验证、论文数据补充

• 医药企业：靶点作用机制验证、药物影响蛋白复合物研究、修饰水平变化分析

• 生物技术企业：标签蛋白互作验证、抗体应用验证、通路机制开发支持

适用研究方向

• 蛋白—蛋白相互作用验证

• 受体—衔接蛋白—下游分子复合物研究

• 转录因子与辅因子复合物分析

• 药物干预前后蛋白结合变化

• 泛素化、乙酰化、磷酸化等翻译后修饰检测

• 标签蛋白与内源蛋白互作验证

• 蛋白截短体结合分析

• 功能结构域定位与突变体验证

免疫共沉淀常见认识误区

免疫共沉淀并不是“只要两个蛋白都表达就一定能拉下来”。Co-IP 成败高度依赖互作是否稳定、裂解条件是否温和、洗涤条件是否合适、抗体是否适合 IP 应用，以及目标互作是否在当前样本状态下真实存在。Thermo Fisher 明确指出，Co-IP 需要在裂解和洗涤过程中尽量维持稳定的生理性互作，而非特异结合、抗体污染和互作不稳定都是常见难点。

另一个常见误区是把 Co-IP 和所有“结合类实验”混为一谈。Co-IP 更适合研究 细胞内或组织内天然状态下的蛋白—蛋白相互作用，尤其适合验证在生理条件下是否形成复合物、药物处理后结合是否变化、某个蛋白是否携带特定翻译后修饰。
而 GST pull-down 更偏向一种 体外结合验证方法，通常以 GST 融合蛋白作为诱饵去捕获潜在结合蛋白，更适合验证“这两个蛋白是否有直接结合能力”以及做结合区域初筛。两者并不是替代关系，而是经常配套使用：

• Co-IP 用于证明在细胞内确实存在结合

• GST pull-down 用于验证是否存在直接结合、以及结合区域可能位于哪里

此外，如果研究问题是蛋白与 DNA 结合、蛋白与 RNA 结合、启动子转录活性、核酸定位或 RNA 结合蛋白所结合的 RNA 靶标，则通常应优先考虑 ChIP、EMSA、RNA pull-down、RIP、荧光素酶报告基因、原位杂交等其他技术。

服务流程

客户发送方案 → 方案评估 → 问题反馈与优化 → 正式报价 → 签订合同 → 支付预付款 → 开始实验 → 提交 PDF 版结果报告 → 支付尾款 → 提交完整报告。

流程说明

1. 客户发送方案
提交研究目的、目标蛋白、预期互作蛋白或修饰类型、样本类型、物种信息、分组设计、处理条件及参考文献。

2. 方案评估
评估检测对象是否适合 Co-IP，确认是做内源 Co-IP、标签 Co-IP、截短体 Co-IP，还是做翻译后修饰富集检测，并确认裂解条件、抗体策略和下游检测方式。

3. 问题反馈与优化
指出方案中可能存在的问题，如目标互作过弱、抗体不适合 IP、裂解条件可能破坏复合物、修饰检测更适合先做 IP 再做 WB、某些问题更适合 ChIP 或 RNA pull-down、结构域定位更适合配合 GST pull-down 等，并进行优化。

4. 正式报价
根据样本数量、目标蛋白数量、互作对象数量、是否需标签系统、是否需修饰抗体、是否需截短体比较、是否需重复实验和发表级图版整理等出具正式报价。

5. 签订合同并支付预付款
确认合作内容、周期及交付标准。

6. 开始实验
进入样本裂解、预清、抗体孵育、磁珠或琼脂糖珠捕获、洗涤、洗脱、Western blot 检测和数据分析流程。

7. 提交 PDF 结果报告
实验完成后先提交 PDF 版结果报告供客户确认。

8. 支付尾款并提交完整报告
尾款支付完成后，提交完整终版报告、原始条带图、输入对照、IP 结果图、统计图及整理版发表素材。

样本要求

Co-IP 对样本质量和裂解条件要求高于常规 Western blot。因为 Co-IP 需要在裂解和洗涤过程中尽量保留天然蛋白复合物，所以裂解液成分、盐浓度、去污剂强度、蛋白酶/磷酸酶抑制剂和温度控制都会直接影响结果。

样本要求表

样本说明

• 蛋白互作检测通常优先使用较温和裂解条件

• 泛素化、磷酸化、SUMO 化等修饰检测需配套相应抑制剂

• 若目标互作较弱或瞬时，需在方案评估时提前说明

• 标签系统样本通常比内源样本更容易建立方法，但生理相关性需结合项目背景解释

• 截短体实验需尽量同步评估表达量和输入量，避免把“表达差异”误判为“结合差异”。

交付内容

交付内容包含中文版实验报告、样本信息、抗体信息、实验方法、裂解与洗涤条件、输入对照说明、IP 对照说明、原始条带图、输入样品图、IgG 对照图、目标互作检测图、修饰水平检测图、截短体比较图、统计分析图、图注、结果描述、结论总结及完整终版报告。

标准交付清单

• 中文版实验报告

• 样本与抗体信息

• 实验方法学描述

• 裂解与洗涤条件说明

• 输入对照图

• IgG 对照图

• IP 结果图

• 修饰检测结果图

• 截短体比较结果图

• 图注与结果说明

• 发表级图版整理

• 完整终版报告

售后支持

项目完成后提供终身售后支持，包括：

• 结果解释

• 对照设置说明

• 图版整理

• 投稿补充材料支持

• 后续答疑与补充说明

周期与报价方式

常规 Co-IP 项目周期通常为 20–40 个工作日。涉及内源低表达蛋白、互作较弱、修饰检测、标签系统构建、裂解条件优化、截短体比较、重复实验或发表级图版整理的项目周期相应延长。与普通 Western blot 相比，Co-IP 的方法学优化要求更高，因此前期评估和预实验通常更重要。

报价因素

• 样本数量

• 目标蛋白数量

• 互作对象数量

• 是否做内源 Co-IP 或标签 Co-IP

• 是否检测翻译后修饰

• 是否做截短体/突变体比较

• 是否需条件优化与重复实验

• 是否需统计分析与发表级图版整理

常见问题

免疫共沉淀主要检测什么？
Co-IP 主要用于检测蛋白—蛋白相互作用，以及在富集目标蛋白后分析其所处的翻译后修饰状态或复合物组成。

免疫共沉淀能检测翻译后修饰吗？
可以。常见做法是先用目标蛋白抗体进行 IP，再用抗泛素、抗磷酸化、抗乙酰化等抗体做 Western blot 检测；或者反向先富集修饰型蛋白，再检测目标蛋白。

免疫共沉淀能做蛋白截短实验吗？
可以。常见做法是构建不同长度或不同结构域的截短体，随后比较各构建体与目标蛋白的共沉淀能力，从而初步定位结合区域或关键结构域。Co-IP 在这类实验中更适合回答“该截短体在细胞内是否仍能形成复合物”。

免疫共沉淀和 GST pull-down 的区别是什么？
Co-IP 更适合研究细胞内天然状态下的蛋白互作；GST pull-down 更适合研究两种蛋白是否存在直接结合能力，以及结合区域的初步定位。二者常联合使用：前者证明细胞内互作存在，后者帮助定位直接结合区域。

为什么 Co-IP 需要输入对照和 IgG 对照？
输入对照用于证明目标蛋白在起始样本中存在；IgG 对照用于评估非特异结合。CST 明确指出，正确的实验对照对 Co-IP 结果解释至关重要。

结果是否可直接用于发表？
交付包含原始条带图、输入对照、IgG 对照、统计图、图注说明及整理版图版，可直接用于论文、汇报和结题材料整理。

免疫共沉淀原理

免疫共沉淀利用特异性抗体先富集“诱饵蛋白”，再将与其形成复合物的“猎物蛋白”一并沉淀下来，最终通过 Western blot、质谱或其他方法识别共沉淀分子。

免疫共沉淀实验步骤

1. 样本裂解

采用尽量温和、能维持蛋白复合物的裂解条件制备蛋白裂解液。
Co-IP 比普通 WB 更怕强去污剂和高盐破坏互作。

2. 预清

用空白珠子或对照体系去除部分非特异性结合成分，降低背景。

3. 抗体孵育

将目标蛋白抗体与裂解液孵育，使抗体与诱饵蛋白结合。

4. 珠子捕获

加入 Protein A/G 琼脂糖珠或磁珠，捕获抗体—抗原复合物及其结合伙伴。

5. 洗涤

洗去非特异性蛋白。洗涤条件需在“背景低”和“复合物不被洗掉”之间平衡。

6. 洗脱

将免疫沉淀复合物从珠子上洗脱下来，进入下游检测。

7. Western blot 检测

检测诱饵蛋白是否被成功拉下，以及猎物蛋白是否共沉淀；如分析修饰，则检测泛素、磷酸化或其他修饰信号。

8. 数据分析

结合输入对照、IgG 对照和组间处理条件，分析互作是否存在、是否增强或减弱，或修饰水平是否变化。

9. 蛋白截短体结合分析

当研究目标是确定蛋白的结合区域时，可构建不同截短体或缺失体，分别转染细胞后进行 Co-IP。
通过比较不同构建体与目标蛋白的共沉淀能力，可以判断：

• 哪个结构域参与结合

• 哪段序列是结合所必需

• 某个突变是否破坏互作

• 某段缺失是否削弱或增强结合能力

10. 截短实验结果解释

对于截短实验，结果解释通常遵循以下逻辑：

• 全长蛋白可结合，截短体失去结合：提示被删除区域可能参与互作

• 多个截短体均能结合，但强度不同：提示存在辅助结合区或构象影响

• 仅含某一结构域的片段可拉下目标蛋白：提示该结构域可能是核心结合区

• 突变体失去结合而表达正常：提示该位点可能直接参与互作而非仅影响表达稳定性

免疫共沉淀常见应用表

免疫共沉淀与相关实验的应用区别总表

Co-IP 重点关注 蛋白—蛋白；GST pull-down 更偏 体外直接蛋白—蛋白结合；ChIP 和 EMSA 看 蛋白—DNA；RIP 和 RNA pull-down 看 蛋白—RNA；DNA pull-down 看 DNA—蛋白；荧光素酶报告基因看 转录活性结果；原位杂交看 核酸定位。

技术选择逻辑

• 研究 蛋白是否在细胞内天然结合：优先 Co-IP

• 研究 两个蛋白是否存在直接结合能力：优先 GST pull-down

• 研究 蛋白的哪个结构域参与结合：常用 GST pull-down + 截短体 Co-IP 联合

• 研究 蛋白是否结合启动子或染色质位点：优先 ChIP

• 研究 蛋白是否能与某段 DNA motif 直接结合：优先 EMSA

• 研究 启动子活性是否变化：优先 荧光素酶报告基因

• 研究 某 RNA 会拉下哪些蛋白：优先 RNA pull-down

• 研究 某蛋白会结合哪些 RNA：优先 RIP

• 研究 某 RNA/DNA 在组织中位于哪里：优先 原位杂交 ISH

ChIP 捕获蛋白—DNA 相互作用快照，RIP 是蛋白—RNA 版本，RNA pull-down 以标记 RNA 为诱饵富集 RNA 结合蛋白，EMSA 研究 DNA—蛋白结合，荧光素酶报告基因用于检测启动子驱动的发光信号，ISH 用于在固定样本中定位核酸靶标。

南京博恩生物技术有限公司提供面向科研客户与医药企业的免疫共沉淀实验外包服务，覆盖蛋白—蛋白相互作用验证、蛋白复合物成员分析、药物处理前后互作变化研究、翻译后修饰水平检测及蛋白截短体结合分析。项目交付包含原始条带图、输入对照、IgG 对照、统计分析图及完整中文报告，并提供终身售后支持。
客户提交方案后，项目按“方案评估—问题反馈—报价签约—实验执行—PDF 结果确认—完整报告交付”的标准流程推进。交付结果可直接用于课题研究、论文整理、项目申报与结题汇报。