南京博恩生物技术有限公司面向高校、科研院所、医药企业与生物技术企业，提供从方案评估、抗体筛选、样本处理、荧光染色、共聚焦成像到结果分析的一站式免疫荧光实验外包服务。服务覆盖细胞免疫荧光、组织免疫荧光、石蜡切片免疫荧光、冰冻切片免疫荧光、单标染色、多色共定位染色、核转位分析、细胞骨架观察、亚细胞定位分析及发表级图版输出。

免疫荧光是一种利用荧光标记抗体检测细胞或组织中目标蛋白表达、分布和定位的技术。用于可视化细胞和组织内特定蛋白分布、定位和相互作用的技术；该技术尤其适合观察亚细胞定位、蛋白转位和多重共定位。

交付包含原始荧光图、代表性视野图、单通道图、合并图、共定位分析图、统计结果图及完整中文报告。

项目完成后提供终身售后支持，针对图版整理、结果解释、投稿补充材料准备及后续问题持续响应。

服务适用场景

本服务适用于目标蛋白细胞内定位分析、蛋白核转位研究、膜蛋白分布分析、细胞骨架观察、线粒体/溶酶体/内质网定位研究、双标或多标共定位分析、细胞分化鉴定、神经细胞标志物鉴定、肿瘤干性研究、免疫细胞表型分析及药物处理前后细胞表型变化比较。

与免疫组化相比，免疫荧光更适合观察细胞水平和亚细胞水平的精细定位；与 Western blot 相比，免疫荧光不提供条带和分子量信息，但更擅长回答“蛋白位于哪里”“是否进入细胞核”“两个蛋白是否共定位”“细胞形态是否发生改变”等问题。该技术不仅可视化蛋白空间分布，也可帮助理解蛋白运输、定位变化及其在复杂细胞通路中的作用。

适用客户类型

• 高校与科研院所：课题机制研究、细胞定位分析、论文配图、结题材料整理

• 医药企业：药效机制验证、靶点细胞定位、通路转位分析

• 生物技术企业：抗体应用验证、细胞表型评估、空间定位研究

适用研究方向

• 蛋白亚细胞定位分析

• 核转位与膜转位研究

• 双标/多标共定位分析

• 细胞骨架与形态学变化

• 神经细胞、免疫细胞、干细胞标志物鉴定

• 肿瘤干性、EMT、分化与损伤修复研究

服务流程

客户发送方案 → 方案评估 → 问题反馈与优化 → 正式报价 → 签订合同 → 支付预付款 → 开始实验 → 提交 PDF 版结果报告 → 支付尾款 → 提交完整报告。

流程说明

1. 客户发送方案
提交研究目的、目标蛋白、样本类型、物种信息、分组设计、处理条件及参考文献。

2. 方案评估
评估样本是否适合 IF，确认细胞样本、石蜡切片或冰冻切片方案，确认抗体应用、固定透化条件、封闭体系及染料组合。

3. 问题反馈与优化
指出方案中可能存在的问题，如一抗种属冲突、二抗荧光串色风险、目标蛋白更适合 Western blot 或免疫组化、共定位组合不合理等，并进行优化。

4. 正式报价
根据样本数量、指标数量、单标或多标、是否需共聚焦成像、是否需定量分析、是否需发表级图版整理等出具正式报价。

5. 签订合同并支付预付款
确认合作内容、周期及交付标准。

6. 开始实验
进入固定、透化、封闭、一抗孵育、二抗荧光标记、复染、封片、显微成像和分析流程。

7. 提交 PDF 结果报告
实验完成后先提交 PDF 版结果报告供客户确认。

8. 支付尾款并提交完整报告
尾款支付完成后，提交完整终版报告、原始图、单通道图、合并图、统计图及整理版发表素材。

样本要求

免疫荧光实验对样本状态、固定方式、透化条件和荧光背景控制要求较高。

样本要求表

样本说明

• 细胞定位实验需尽量保持细胞形态完整

• 核蛋白、膜蛋白、细胞骨架蛋白对固定和透化条件较敏感

• 组织 IF 对自发荧光控制和背景封闭要求更高

• 多色共定位实验需提前规划荧光通道和一抗种属

交付内容

交付内容包含中文版实验报告、样本信息、抗体信息、实验方法、固定与透化条件、封闭体系、染料信息、拍照参数、图注、结果描述、结论总结、原始荧光图、单通道图、合并图、共定位分析图、荧光强度统计图、阳性细胞比例分析图、发表级整理图版及完整终版报告。

标准交付清单

• 中文版实验报告

• 样本与抗体信息

• 实验方法学描述

• 固定、透化与封闭参数

• 原始荧光图片

• 单通道图

• 合并图

• 共定位分析图

• 荧光强度统计图

• 发表级图版整理

• 完整终版报告

售后支持

项目完成后提供终身售后支持，包括：

• 结果解释

• 定位与共定位分析说明

• 图版整理

• 投稿补充材料支持

• 后续答疑与补充说明

周期与报价方式

常规 IF 项目周期通常为 20–40 个工作日。涉及多色共染、共聚焦成像、抗体筛选、荧光通道优化、重复实验、复杂统计分析或发表级图版整理的项目周期相应延长。

报价因素

• 样本数量

• 指标数量

• 单标或多标

• 是否需共聚焦成像

• 是否需共定位分析

• 是否需荧光强度定量

• 是否需发表级图像整理

• 是否涉及特殊物种、特殊抗体或特殊荧光通道

常见问题

免疫荧光适合解决什么问题？
免疫荧光更适合回答目标蛋白位于细胞哪里、是否位于细胞核/胞浆/细胞膜、是否与另一蛋白共定位、药物处理后是否发生核转位、细胞骨架或形态是否发生变化等问题。

免疫荧光和免疫组化的区别是什么？
免疫荧光更适合细胞水平、亚细胞水平和多色共定位分析；免疫组化更适合组织病理背景下的定位和常规明场观察。

免疫荧光和 Western blot 的区别是什么？
免疫荧光用于定位和共定位分析；Western blot 用于蛋白大小、条带特异性和修饰状态分析。前者强调空间分布，后者强调蛋白分离后的特异检测。

双标或多标实验如何避免串色和交叉反应？
优先使用不同种属来源的一抗，例如兔抗 + 鼠抗，再分别搭配不同荧光通道的二抗；必要时使用交叉吸附二抗降低交叉反应。

结果是否可直接用于发表？
交付包含原始图、单通道图、合并图、统计图、图注说明及发表级整理图版，可直接用于论文配图、结题材料与项目汇报。

免疫荧光原理

免疫荧光利用荧光标记抗体与目标抗原发生特异性结合，再通过荧光显微镜或共聚焦显微镜检测荧光信号，从而观察目标蛋白在细胞或组织中的表达、定位与相互关系。

免疫荧光实验步骤

1. 样本固定

固定用于维持细胞或组织结构并保留抗原性。固定剂类型和固定时间会直接影响形态保存和抗原暴露。

2. 透化

胞内蛋白、核蛋白和细胞骨架蛋白通常需要透化，以便抗体进入细胞内部；膜表面抗原则需谨慎控制透化条件。

3. 封闭

通过 BSA 或适当封闭体系减少非特异性结合和背景信号。Abcam 的协议将 BSA 封闭列为标准步骤之一。

4. 一抗孵育

根据目标蛋白、样本物种、定位和是否共染选择一抗，并优化孵育浓度和时间。

5. 二抗荧光标记

根据一抗来源种属选择二抗，并搭配合适荧光通道。多重染色时应避免发射光谱重叠。

6. 核染与辅助染色

常配合 DAPI 等核染色，也可加入细胞骨架或细胞器染色，以提升定位判断的准确性。

7. 封片

使用适合荧光成像的封片体系，减少荧光淬灭，提升图像稳定性。

8. 显微成像

通过荧光显微镜或共聚焦显微镜获取单通道图和合并图，记录目标蛋白空间分布与共定位情况。

9. 图像分析

根据项目需求进行荧光强度分析、阳性率统计、核转位分析和共定位系数分析。

10. 结果整理

输出单通道图、合并图、统计图和发表级排版图版，形成适合投稿和汇报的完整结果。

免疫荧光与其他常见实验的对比分析

免疫荧光的核心优势在于空间定位与共定位；免疫组化的优势在于组织结构背景；Western blot 的优势在于蛋白大小与修饰状态；流式的优势在于单细胞群体分析。

实验选择逻辑

常见细胞与应用场景 marker 选择表

免疫细胞亚群与极化表型 marker 选择表

免疫荧光中，免疫细胞 marker 的选择不能只看“细胞类型”，还要看 功能状态、极化方向、样本物种和组织背景。
对于 Th1/Th2/Th17/Treg、M1/M2 巨噬细胞、树突细胞亚群、中性粒细胞和 MDSC 等复杂免疫表型，通常应采用 “基础谱系 marker + 分型 marker + 功能 marker” 的组合策略。

一、T 细胞及辅助性 T 细胞亚群

二、巨噬细胞及极化表型

M1/M2 是功能表型，不建议依赖单一 marker 下结论；更稳妥的是用“总巨噬细胞 marker + 极化 marker”联合判断。

三、树突细胞、单核细胞、中性粒细胞与 NK 细胞

免疫细胞 marker 选择说明

1. Treg 与 Th17 不能只看单一 marker
Treg 最常见的稳妥组合是 CD3 + CD4 + FOXP3 + CD25，必要时增加 CD127 low；Th17 更推荐 CD3 + CD4 + RORγt + IL-17A 联合判断。

2. M1/M2 巨噬细胞建议用“双层判断”
更稳妥的表达方式是：

• 人样本：CD68 + iNOS/CD80/CD86 判定 M1 倾向，CD68      + CD163/CD206 判定 M2 倾向

• 小鼠样本：F4/80 + iNOS/CD80/CD86 判定 M1 倾向，F4/80      + CD206/Arginase-1 判定      M2 倾向。

3. 人和小鼠的免疫细胞 marker 不能直接照搬
典型差异包括：

• 巨噬细胞：人常用 CD68/CD163，鼠常用 F4/80

• pDC：人常用 CD123/CD303/CD304，鼠常用      Siglec-H/CD317

• 中性粒细胞：人常用 CD15/CD16，鼠常用 Ly6G

• MDSC：人常用 CD33/HLA-DR low，鼠常用      Gr1/Ly6C/Ly6G。

4. 双标实验要同时考虑“样本物种”和“一抗来源种属”
例如样本是小鼠脾脏，也可以选用兔抗小鼠 FoxP3 和鼠抗小鼠 CD4，前提是两种抗体均明确支持小鼠反应性，且一抗来源种属不同，后续再分别配对应二抗。

南京博恩生物技术有限公司提供面向科研客户与医药企业的免疫荧光实验外包服务，覆盖细胞与组织定位分析、核转位研究、共定位分析、细胞骨架观察、细胞标志物鉴定及发表级图版整理。项目交付包含原始荧光图、单通道图、合并图、统计分析图、发表级大图及完整中文报告，并提供终身售后支持。
客户提交方案后，项目按“方案评估—问题反馈—报价签约—实验执行—PDF 结果确认—完整报告交付”的标准流程推进。交付结果可直接用于课题研究、论文整理、项目申报与结题汇报。